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ELISA捕获包被法检测抗体原理及其简单步骤
浏览次数:534发布日期:2019-11-22

做实验的时候你知道ELISA捕获包被法检测抗体原理和步骤吗,上海丰寿生物科技有限公司来告诉你。

一、原理

捕获包被法(亦称反向间接法)ELISA,主要用于血清中某种抗体亚型成分(如IgM)的测定。以目前常用的IgM测定为例,因血清中针对某种抗原的特异性IgM和IgG同时存在,则后者可干扰IgM的测定。因此先将所有血清IgM(包括异性IgM和非特异性IgM)固定在固相上,在去除IgG后再测定特异性IgM。IgM抗体的检测用于传染病的早期诊断中。先用抗人IgM抗体包被固相,以捕获血清标本中的IgM(其中包括针对抗原的特异性IgM抗体和非特异性的IgM)。然后加入抗原,此抗原仅与特异性IgM相结合。继而加酶标记针对抗原的特异性抗体。再与底物作用,呈色即与标本中的IgM成正相关。此法常用于病毒性感染的早期诊断。类风湿因子(RF)同样能干扰捕获包被法测定IgM抗体,导致假阳性反应。因此中和IgG的间接法近来颇受青睐,用这类试剂检测抗CMV IgGM和抗弓形虫IgM抗体已获成功。


捕获法测抗体的简要操作步骤:


1.特异性捕获抗体的包被,先把能特异性结合待测抗原的抗体固定于固相载体表面;


2.加入待测样品,通过固定在载体表面的针对该抗原的抗体固定于载体表面;


3.加入特异性抗原以及针对该特异性抗原的酶标抗体;


4.加入酶促反应底物,发生显色反应,显色的深浅与待测抗体的量成正比。


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