您好,欢迎进入上海纪宁实业有限公司网站!
一键分享网站到:
您现在的位置:首页 >> 技术文章 >> 今日解析:关于ELISA试剂盒HIV测定过程
今日解析:关于ELISA试剂盒HIV测定过程
浏览次数:62发布日期:2020-03-23

1 配液:ELISA试剂盒将50ml浓缩洗刷液用蒸馏水或去离子水20倍稀释至1000ml备用。

2 编号:将样品对应微孔按序编号,每板设阴性对照3孔、阳性对照Ⅰ型、Ⅱ型各1孔,空白对照1孔。

3 加样:分别在相应孔加入待检标本、阴性、阳性对照100μl,用封板膜封板后置37℃温育30min。

4 洗刷:当心把封板膜揭去,用洗板机挑选5次程序,洗板后拍干。 

5 加酶:每孔加酶结合物100μl(空白对照孔除外),充沛混匀,用封板膜封板后置37℃温育30min。

6 洗刷:当心把封板膜揭去,用洗板机挑选5次程序,洗板后拍干。

7 显色:每孔加入显色剂A液和B液各50μl,悄悄振动混匀,封板后置37℃避光显色15min。

8 测定:每孔加终止液50μl,悄悄振动混匀。设定酶标仪波长为450nm(建议使用双波长的酶标仪比色,参阅波长630 nm),空白调零,读取各孔OD值。

9 判断成果:核算临界值(cut-off)(CO)值。 临界值=阴性对照A均值+0.12 正常情况下,阴性对照孔的OD值≤0.10(若1孔阴性对照的OD值>0.1应放弃,若有2孔或2孔以上阴性对照的OD值>0.1,应重复实验。)。样品OD值<临界值者为HIV抗体阴性。

正常情况下,阳性对照孔的OD值≥0.80(若1孔阳性对照的OD值<0.8应放弃,若有2孔或2孔以上阳性对照的OD值<0.8,应重复实验。样品OD值≥临界值者为HIV抗体阳性。 

ELISA试剂盒注意:关于筛查阳性标本,应从头取样双孔复试,复试阳性者应按照《全国HIV检测管理规范》送HIV确证实验室进行确证实验。 质量操控: 每块板设阴阳性及空白对照,并于每次实验用克己质控血清作质控,将质控血清孔OD值采用“即刻法"核算或标在质控图上,如质控有效,标明实验牢靠;如失控,则要查看试剂效期、贮藏温度、试 验温度是否正常、操作过程是否正确,直至从头实验使其在控。 

 

    QQ在线客服
  •   在线咨询
  • 点击这里给我发消息
电话
021-54845833
手机
021--54845833