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我司解析细胞培养基预防污染的方法
浏览次数:102发布日期:2020-05-06

细胞培养基受各种霉菌、细菌和支原体污染后,一般都较难排除或杀灭,其中以支原体更难排除,因此从预防着眼为上。

一、抗生素除菌法:用BM-1(截耳素衍生物)和BM-2(四环素衍生物)抑制支原体。

1.抗生素制备:均可用PBS配成250×浓缩液-20℃备用。

2.处理:取受支原体污染的细胞,吸除培养液,加入含BM-1的1640培养液培养3天后,吸除培养液,再加入含BM-2的1640培养液培养4天,如此连续三个轮回。

3.检测:用33258荧光染色镜检(每个轮回末应检测一次)。

4.培养:清除支原体后的细胞,在不加上述抗生素的培养基液中,再传代培养3~4次。

5.镜检:如清除不彻底可再进行处理至纯净为止(一般3个轮回即能被完全消除),即先用含BIP培养液培养12天后,再按上述方法处理。

二、加温除菌法

把受污染的细胞置41℃中作用5~10小时。

三、动物体内接种除菌法

把受支原体污染的肿瘤细胞接种在同种动物皮下或腹腔中,借动物免疫系统消灭支原体,而肿瘤细胞却能在体内继续生长,待一定时间后,从体内取出细胞培养基再进行培养繁殖。

四、巨噬细胞吞噬法

从动物腹腔采取巨噬细胞,为排除其它细胞成分,可先进行纯化,然后再加入被支原体污染的细胞培养液中混合培养。在培养过程中,为检查支原体是否已被消除干净,可利用支持物培养法验证,取出支持物逐日染色、镜检观察,至支原体已被消除干净为止。

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