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教你血球计数板细胞计数的方法
浏览次数:166发布日期:2020-07-13

1.制备细胞悬液:关于悬液培养的细胞,可直接进行下面的过程2(计数与核算进程)。假设计数目标为贴壁生长的细胞,首要需将培养物按如下过程制备成细胞悬液。

①停止培养,将培养液吸出,用PBS洗培养物一次。

②给培养瓶内参加1ml 0.25%胰蛋白酶溶液,于37℃消化3~5min 。期间不断在镜下调查。当细胞变圆挨近脱壁时,弃消化液。

③参加一定量的培养液(假设这些培养细胞不再有用,可加PBS),用吸管吹打,使细胞脱壁而制成细胞悬液。

2.计数与核算进程

①在细胞计数板中心放置计数专用的盖玻片。

②用玻璃虹吸管吸取细胞,让虹吸管在盖玻片上或下侧的计数板凹蹧处流出悬液,至盖玻片被液体充满停止。

③置显微镜下计数四角大方格内的细胞总数。关于压线的细胞只计数在上线和左线者,关于细胞团按单个细胞计数。

④按下式计数细胞悬液的密度:细胞密度=(4个大格细胞总数/4)×104个/ml 。

二、注意事项:

①必须使松散成单个细胞,取样计数前,充分混匀细胞悬液。

②显微镜下计数时,遇到2个以上细胞组成的细胞团,应按单个细胞核算。假设细胞团>10%,阐明细胞松散不充分。

 

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