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ELISA试剂盒检测步骤对科研界的影响

点击次数:429 发布时间:2018-03-20
 

ELISA试剂盒检测步骤是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA)已知浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将生物素标记的抗体同时温育。洗涤后,加入亲和素标记过的。再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中的浓度呈比例关系。elisa试剂盒检测步骤不仅适用于临床标本的检查,而且由于一天之内可以检查几百甚至上千份标本 ,因此也适合于血清流行病学调查。elisa试剂盒检测步骤不仅可以用来测定抗体,而且也可用于测定体液中的循环抗原,所以也是一种早期诊断的良好方法。因此elisa试剂盒检测步骤在生物医学各领域的应用范围日益扩大。
ELISA试剂盒检测步骤:
1.标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在*、第二孔中分别加标准品100μl,然后在*、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从*孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;elisa试剂盒检测步骤混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为60μmol/L,40μmol/L ,20μmol/L,10μmol/L, 5μmol/L)。
2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。elisa试剂盒检测步骤在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品zui终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。 
3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。 
5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,elisa试剂盒检测步骤每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。 
6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7.温育:操作同3。 8.洗涤:操作同5。 
9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11.测定:ELISA试剂盒以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

 

 

 
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