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柠檬酸合酶CS测试盒_乙醛酸循环系列_分光法

  • 更新时间:  2022-07-26
  • 产品型号:  50管/12样
  • 简单描述
  • 柠檬酸合酶CS测试盒_乙醛酸循环系列_分光法由上海纪宁生物公司提供,包括CS检测试剂盒说明书,免费代测,规格,包装,品牌等关于有关本司测试盒所有产品的详细介绍。
详细介绍

柠檬酸合酶CS测试盒_乙醛酸循环系列_分光法

测定方法:分光光度法

产品规格:50管/12样

注  意:正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

CS(EC 2.3.3.1)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体基质中,是三羧酸循环第一个限速酶,是三羧酸循环主要调控位点之一。

测定原理:

CS 催化乙酰 CoA 和草酰乙酸产生柠檬酰辅酶 A,进一步水解产生柠檬酸;该反应促使无色的 DTNB 转变成黄色的 TNB,在 412nm 处有特征吸光值。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰、无水乙醇和蒸馏水

试剂组成和配制:

试剂一:液体 25mL×1 瓶,-20℃保存;

试剂二:液体 5mL×1 瓶,-20℃保存;

试剂三:液体 0.5mL×1 支,-20℃保存;

试剂四:液体 28mL×1 瓶,4℃保存;

试剂五:粉剂×1 瓶,4℃保存;

试剂六:粉剂×1 支,-20℃保存,临用前加入 1.2mL 蒸馏水,用不完的试剂仍-20℃保存;

柠檬酸合酶CS测试盒_乙醛酸循环系列_分光法

样本的前处理:

组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离:

①称取约 0.1g 组织或收集 500 万细胞,加入 1mL 试剂一和 10uL 试剂三,用冰浴匀浆器或研钵匀浆。

②将匀浆 600g,4℃离心 5min。

③弃沉淀,将上清液移至另一离心管中,11000g,4℃离心 10min。

④上清液即胞浆提取物,可用于测定从线粒体泄漏的 CS(此步可选做)。

⑤在步骤④的沉淀中加入 200uL 试剂二和 2uL 试剂三,超声波破碎(冰浴,功率 20%或200W,超声 3 秒,间隔 10 秒,重复 30 次),用于线粒体 CS 测定。

测定步骤:

1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 412nm,蒸馏水调零。

2、样本测定

(1)在试剂五中加入 0.6mL 无水乙醇和 13mL 试剂四,混匀,37℃(哺乳动物)或 25℃(其

它物种)孵育 5min;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;

(2)测定管:在 EP 管中加入 40μL 样本、880μL 试剂五和 40μL 试剂六,混匀,37℃反应 15min 后立即测定吸光值 A1。

(3)对照管:在 EP 管中加入 40μL 样本、880μL 试剂四和 40μL 试剂六,混匀,37℃反应 15min 后立即测定吸光值 A2。


(4)

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计算 ΔA=A1-A2,每个测定管设一个对照管。



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