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柠檬酸合酶CS测试盒_乙醛酸循环系列_分光法

  • 更新时间:  2022-07-26
  • 产品型号:  50管/24样
  • 简单描述
  • 柠檬酸合酶CS测试盒_乙醛酸循环系列_分光法由上海纪宁生物公司提供,包括CS检测试剂盒说明书,免费代测,规格,包装,品牌等关于有关本司测试盒所有产品的详细介绍。
详细介绍

柠檬酸合酶CS测试盒_乙醛酸循环系列_分光法

测定方法:分光光度法

产品规格:50管/24样

注    意:正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做估量定

测定意义:

CS(EC 2.3.3.1)廣泛存在於動物、植物、微生物和培養細胞的線粒體基質中,是三羧酸迴圈個限速酶,是三羧酸迴圈主要調控位點之一。

测定原理:

CS催化乙醯CoA和草醯乙酸產生檸檬醯,進一步水解產生檸檬酸;該反應促使無色的DTNB轉變成黃色的TNB,在 412nm處有特徵吸光值。

柠檬酸合酶CS测试盒_乙醛酸循环系列_分光法

自备仪器和用品:

可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰、無水乙醇和蒸餾水

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试剂组成和配制:

試劑一:液體50mL×1瓶,-20℃保存;

試劑二:液體10mL×1瓶,-20℃保存;

試劑三:液體1mL×1支,-20℃保存;

試劑四:液體55mL×1瓶,4℃保存;

試劑五:粉劑×1瓶,4℃保存;

試劑六:粉劑×1支,-20℃保存,臨用前加入2.4mL蒸餾水,用不完的試劑仍-20℃保存;

樣本的前處理:

組織、細菌或細胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離:

①稱取約0.1g組織或收集500萬細胞,加入1mL試劑一和10uL 試劑三,用冰浴勻漿器或研缽勻漿。

②將勻漿600g,4℃離心5min。

③棄沉澱,將上清液移至另一離心管中,11000g,4℃離心10min。

④上清液即胞漿提取物,可用於測定從線粒體洩漏的CS(此步可選做)。

⑤在步驟④的沉澱中加入200uL試劑二和2uL 試劑三,超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3秒,間隔10秒,重複30次),用於線粒體CS測定。

測定步驟:

1、分光光度計或酶標儀預熱30min以上,調節波長至412nm,蒸餾水調零。

2、樣本測定

(1)在試劑五中加入1.2mL無水乙醇和26mL試劑四,混勻,37℃(哺乳動物)或25℃(其他物種)孵育5min;用不完的試劑分裝後-20℃保存,禁止反復凍融;

(2)測定管:在EP管中加入40μL樣本、880μL試劑五和40μL試劑六,混勻,37℃反應15min後立即測定吸光值A1。

(3)對照管:在EP管中加入40μL樣本、880μL試劑四和40μL試劑六,混勻,37℃反應15min後立即測定吸光值A2。

(4)計算ΔA=A1-A2,每個測定管設一個對照管。



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