蔗糖系列_蔗糖磷酸化酶(SP)测试盒_微量法
蔗糖系列_蔗糖磷酸化酶(SP)测试盒_微量法
测定方法:微量法
产品规格:100管/96样
注 意 :正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
SP(EC2.4.1.7)主要存在于微生物和植物中,裂解葡萄糖苷键,催化葡萄糖基转移到果糖、木糖、半乳糖和鼠李糖等,合成相应的葡萄糖基低聚糖。此外,SP还能催化合成熊果苷,具有很好的美白效果,在化妆品工业中具有重要应用。
蔗糖系列_蔗糖磷酸化酶(SP)测试盒_微量法
测定原理:
SP能够以磷酸为受体,催化蔗糖产生1-磷酸葡萄糖,在葡萄糖磷酸变位酶催化下变位为6-磷酸葡萄糖,在6-磷酸葡萄糖脱氢酶作用下还原NADP+生成NADPH,导致340nm光吸收值增加。测定340nm吸光度增加速率,即可计算SP活性。
自备实验用品及仪器:
天平、低温离心机、恒温水浴锅、酶标仪、96孔板和蒸馏水。
试剂组成和配制:
提取液:液体100mL×1瓶,4℃保存。
试剂一:液体15mL×1瓶,4℃保存。
试剂二:粉剂×1支,-20℃避光保存,临用前加2.5mL蒸馏水溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
试剂三:粉剂×1支,-20℃避光保存,临用前加5mL蒸馏水溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
粗酶液提取:
1. 组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液)进行冰浴匀浆,然后10000g,4℃,离心10min,取上清待测。
2. 细菌、真菌:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后10000g,4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。