谷胱系列氧化型(GSSG)含量测试盒_微量法

测定方法：微量法

产品规格：100管/96样

注    意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：

GSH/GSSG是细胞内最重要的氧化还原对之一。因此，测定细胞内GSH和GSSG含量以及GSH/GSSG比值，能够很好地反映细胞所处的氧化还原状态，也是(GSSG)氧化还原循环的主要指标之一。

谷胱系列氧化型(GSSG)含量测试盒_微量法

测定原理：

利用2-VP法测GSSG含量。

自备仪器和用品：

低温离心机、水浴锅、可调节移液器、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、和蒸馏水。

试剂组成和配置：

试剂一：液体100mL×1瓶，4℃保存。

试剂二：液体600μL×1支，4℃保存。

试剂三：液体50mL×1瓶，4℃保存。

试剂四：液体2.5mL×1瓶，4℃保存。

试剂五： 液体15μL×1瓶，-20℃保存。临用前加入0.3mL试剂三稀释，4℃保存。

试剂六：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加入20 mL试剂三溶解，现配现用。

粗酶液提取：

1. 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清液（如上清不清澈，再离心3min）待测。

2. 细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；8000g 4℃离心10min，取上清液（如上清不清澈，再离心3min）混匀待测。

3. 血清等液体：直接测定。

GSSG含量测定：

1. 分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长到412nm，蒸馏水调零。

2. 试剂三置于25℃（一般物种）或者37℃（哺乳动物）水浴中保温30min。

3.取1 mL EP管，加入100μ L上清液，5 μ L试剂二，盖紧后混匀，得混合液，置于37℃水浴30min；取21μ L混合液于96孔板，然后依次加入20 μ L试剂四、2 μ L试剂五和140 μ L试剂六，迅速混匀后，测定30 s和150 s光吸收A1和A2，计算ΔA=A2-A1。