谷胱系列氧化型(GSSG)含量测试盒_微量法
谷胱系列氧化型(GSSG)含量测试盒_微量法
测定方法:微量法
产品规格:100管/96样
注 意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
GSH/GSSG是细胞内重要的氧化还原对之一。因此,测定细胞内GSH和GSSG含量以及GSH/GSSG比值,能够很好地反映细胞所处的氧化还原状态,也是(GSSG)氧化还原循环的主要指标之一。
谷胱系列氧化型(GSSG)含量测试盒_微量法
测定原理:
利用2-VP法测GSSG含量。
自备仪器和用品:
低温离心机、水浴锅、可调节移液器、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、和蒸馏水。
试剂组成和配置:
试剂一:液体100mL×1瓶,4℃保存。
试剂二:液体600μL×1支,4℃保存。
试剂三:液体50mL×1瓶,4℃保存。
试剂四:液体2.5mL×1瓶,4℃保存。
试剂五: 液体15μL×1瓶,-20℃保存。临用前加入0.3mL试剂三稀释,4℃保存。
试剂六:粉剂×1瓶,4℃保存。临用前加入20 mL试剂三溶解,现配现用。
粗酶液提取:
1. 组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清液(如上清不清澈,再离心3min)待测。
2. 细菌、真菌:按照细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);8000g 4℃离心10min,取上清液(如上清不清澈,再离心3min)混匀待测。
3. 血清等液体:直接测定。
GSSG含量测定:
1. 分光光度计/酶标仪预热30min,调节波长到412nm,蒸馏水调零。
2. 试剂三置于25℃(一般物种)或者37℃(哺乳动物)水浴中保温30min。
3.取1 mL EP管,加入100μ L上清液,5 μ L试剂二,盖紧后混匀,得混合液,置于37℃水浴30min;取21μ L混合液于96孔板,然后依次加入20 μ L试剂四、2 μ L试剂五和140 μ L试剂六,迅速混匀后,测定30 s和150 s光吸收A1和A2,计算ΔA=A2-A1。