(GSH)还原酶(GR)测试盒谷胱系列_分光光度法

测定方法：分光光度法

产品规格：50管/48样

注    意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：

GR是广泛存在于真核和原核生物中的一种黄素蛋白氧化还原酶，是(GSH)氧化还原循环的关键酶之一（通常昆虫中GR被TrxR取代）。GR催化NADPH还原GSSG生成GSH，有助于维持体内GSH/GSSG比值。GR在氧化胁迫反应中对活性氧清除起关键作用，此外GR还参与抗坏血酸－(GSH)循环途径。

(GSH)还原酶(GR)测试盒谷胱系列_分光光度法

测定原理：

GR能催化NADPH还原GSSG再生GSH，同时NADPH脱氢生成NADP+；NADPH在340 nm有特征吸收峰，相反NADP+在该波长无吸收峰；通过测定340 nm吸光度下降速率来测定NADPH脱氢速率，从而计算GR活性。

自备仪器和用品：

低温离心机、水浴锅、移液器、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、和蒸馏水

试剂组成和配置：

试剂一：液体120mL×1瓶，4℃保存。

试剂二：粉剂×2支，-20℃保存。临用前加入1.2mL蒸馏水，混匀。

试剂三：粉剂×2支，-20℃保存。临用前加入0.6mL蒸馏水，混匀。

粗酶液提取：

1.组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。8000g，4℃离心15min，取上清，置冰上待测。

2.细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心15min，取上清置于冰上待测。

3.血清等液体：直接测定。

操作步骤：

1. 分光光度计/酶标仪预热30 min，调节波长到340 nm，蒸馏水调零。

2. 试剂一置于25℃（普通物质）或者37℃（哺乳动物）中预热30min。

3. 测定管：取微量石英比色皿或96孔板，依次加入10μL试剂三，20μL试剂二，150μL试剂一，20μL上清液，混匀，于340nm迅速测定初始吸光度和180 s吸光度，记为A测1和A测2，△A测定管= A测1﹣A测2。