γ谷氨酰转肽酶γ-GT测试盒谷胱系列_分光法

测定方法：分光光度法

产品规格：50管/48样

注    意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：

γ-GT是γ-谷氨酰循环中的关键酶，催化GSH降解。γ-GT催化GSH或者其他γ-谷氨酰基化合物上的γ-谷氨酰基转移到受体。也可以催化GSH和其他γ-谷氨酰基化合物的水解，产生GLU盐，在细胞外(GSH新陈代谢中起了重要的作用。

测定原理：

γ-GT催化谷氨酰对硝基苯胺中γ-谷氨酰基转移给N-甘氨酰Gly，生成对硝基苯胺，在405nm有特征光吸收；通过测定405nm光吸收增加速率，来计算γ-GT酶活性。

自备仪器和用品：

可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调节移液器、1mL玻璃比色皿和蒸馏水

试剂组成和配制：

试剂一：液体50mL×1瓶，4℃保存。

试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。

试剂三：液体10mL×1瓶，4℃保存。

试剂四：液体37mL×1瓶，4℃保存。

工作液（在试剂二瓶中配制）：临用前配制，把试剂三倒入试剂二瓶中，充分溶解（室温过低时可以40℃水浴促进溶解）；然后把试剂四倒入试剂二瓶中，混匀后室温保存。

γ谷氨酰转肽酶γ-GT测试盒谷胱系列_分光法

粗酶液提取：

1.组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。8000g，4℃离心15min，取上清，置冰上待测。

2.细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心15min，取上清置于冰上待测。

3. 血清等液体：直接测定。

γ-GT测定操作

1. 分光光度计预热30min，调节波长到405 nm，蒸馏水调零。

2. 试剂二置于25℃（一般物种）或者37℃（哺乳动物）水浴中预热30min（保证无沉淀）。

3. 测定管：取1mL玻璃比色皿，依次加入100μL上清液，900μL工作液，混匀后于405nm测定10 s和70 s时吸光度，记为A1和A2。