乙酰酯酶(AchE)测试盒_酯酶系列_分光光度法

测定方法：分光光度法

产品规格：50管/48样

注   意 ：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：

AchE属于Ser水解酶，广泛存在于各种动物组织和血清中。AchE催化乙酰（Ach）水解，在神经传导调节中起重要作用。

乙酰酯酶(AchE)测试盒_酯酶系列_分光光度法

测定原理：

AchE催化Ach水解生成与二硫对硝基苯甲酸（DTNB）作用生成5-巯基-硝基苯甲酸（TNB）；TNB在412nm处有吸收峰，通过测定412 nm吸光度增加速率，计算AchE活性。

自备仪器和用品：

可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调式移液枪、1mL玻璃比色皿和蒸馏水。

试剂组成和配制：

提取液：液体×1瓶，4℃保存。

试剂一：液体×1瓶，4℃保存。

试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加入2.6mL试剂一，充分震荡溶解。

试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加入2.6mL试剂一，充分震荡溶解。

粗酶液提取：

1.组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆，8000g 4℃离心10min，取上清液待测。

2.细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。

3.血清等液体：直接测定。

测定操作：

1. 分光光度计预热30 min，调节波长到412 nm，蒸馏水调零。

2. 试剂二置于37℃水浴中预热30min。

3. 取1mL玻璃比色皿，依次加入100μL上清液、800 μL试剂一、50μL试剂二和50 μL试剂三，迅速混匀，于412nm处测定3min内吸光值变化，第10s吸光值记为A1，第190s吸光值记为A2。△A测定管=A2-A1。