山梨-醇脱氢酶(SH)测试盒_糖代谢系列
山梨-醇脱氢酶(SH)测试盒_糖代谢系列
测定方法:分光光度法
产品规格:50管/48样
注 意 :正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
SH(EC 1.1.1.14)催化山梨-醇脱氢生成果糖,是调控生物体内山梨-醇含量的关健酶之一。
山梨-醇脱氢酶(SH)测试盒_糖代谢系列
测定原理:
SH催化山梨-醇脱氢生成果糖,同时还原NAD+生成NADH,测定340nm吸光度增加速率可以计算SH活性。
需自备的仪器和用品:
紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制:
提取液:液体60mL×1瓶,4℃保存;
试剂一:液体20mL×1瓶,4℃保存;
试剂二:粉剂×1瓶,4℃保存;临用前每瓶加入15mL蒸馏水,用不完的试剂仍4℃保存。
试剂三:粉剂×1瓶,-20℃保存;临用前每瓶加入15mL蒸馏水,用不完的试剂仍-20℃保存。
粗酶液提取:
1、细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
2、组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
3、血清(浆)样品:直接检测。