糖代谢系列_滤纸酶测试盒
糖代谢系列_滤纸酶测试盒
测定方法:微量法
产品规格:100管/48样
测定意义:
纤维素酶是由微生物产生的多组分的酶系,能水解纤维素β-1,4葡萄糖苷键生成葡萄糖,研究滤纸酶活力对纤维素酶的研究具有非常重要的意义。
糖代谢系列_滤纸酶测试盒
测定原理:
滤纸酶水解滤纸产生的还原糖能与3,5-二硝基水杨酸生成红棕色氨基化合物,在540nm处有大光吸收,在一定范围内反应液颜色深浅与还原糖的量成正比,可测定计算得滤纸酶的活力。
自备实验用品及仪器:
天平、研钵、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、恒温水浴锅。
试剂组成和配制:
试剂一:液体25mL×1瓶,4℃保存。
试剂二:液体40mL×1瓶,4℃保存。
滤纸条:50mg×50条。
酶液提取:
1.组织:按照质量(g):蒸馏水体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g,加入1mL蒸馏水)加入蒸馏水,冰浴匀浆后于4℃,12000rpm离心10min,取上清置于冰上待测。
2.细胞:按照细胞数量(104个):蒸馏水体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后4℃,12000rpm离心10min,取上清置于冰上待测。
3.培养液或其它液体:直接检测。
测定操作:
1.根据样本数量取两倍数量的滤纸条和Ep管,每支Ep管中放入一个卷状滤纸条(注意要放入底部),作为底物。
2.对照管:取200μL灭活的酶液,加入500μL试剂一,充分混匀,再加入放有滤纸条的Ep管中,标注为对照管。
3.测定管:取200μL酶液,加入500μL试剂一,充分混匀,再加入放有滤纸条的Ep管中,标注为测定管。
4.对照管和测定管同时置于50℃水浴锅中反应30min。
5.加入800μL试剂二,沸水浴5min,自来水冷却后取200μL于微量石英比色皿/96孔板中测定540nm处吸光值,分别记为A对照管和A测定管,△A= A测定管- A对照管。