羟脯-氨酸(HYP)测试盒_氨基酸代谢系列

测定方法：分光光度法

产品规格：50管/48样

注   意 ： 正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：

HYP是机体胶原蛋白主要成分之一，胶原蛋白大多分布于皮肤、腱、软骨和血管等，因此HYP含量是反映胶原组织代谢及纤维化程度的一项重要指标。

羟脯-氨酸(HYP)测试盒_氨基酸代谢系列

测定原理：

样品经酸水解产生游离的HYP，进一步被氯胺T氧化，氧化产物与对二甲氨基苯-甲醛反应，产生红色化合物，在560nm处有特征吸收峰。通过测定样品水解液560nm吸光值，可计算HYP含量。

自备实验用品及仪器：

天平、烘箱、玻璃管、离心机、水浴锅、可见分光光度计、1 mL玻璃比色皿、无水乙醇、异丙醇、6mol/L盐酸和蒸馏水。

试剂组成和配制：

组织提取液：6mol/L盐酸，自备。浓盐酸：H2O（V/V）= 1:1，室温保存。

细胞提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存。

试剂一：液体10mL×1瓶，4℃避光保存。

试剂二：液体10mL×1瓶，4℃避光保存。

羟脯-氨酸提取：

1.组织：称取约0.5g样品于玻璃管，加入5mL的组织提取液，置于110℃烘箱，水解6至12小时，用提取液定容至5mL，12000g，25℃，离心20min，取上清待测。

2.细胞：取500万个细胞，加入2mL的细胞提取液，于高压消毒器中15磅保持30min，自然降压后待测。

3.血清游离羟脯-氨酸提取：取0.2mL血清，加入1mL无水乙醇使蛋白质沉淀，8000g4℃离心5min。将上清倒入另一个EP管，氮吹或沸水浴将乙醇挥发干。冷却后再加入0.4mL50%异丙醇，充分溶解混匀待测。