羟脯-氨酸(HYP)测试盒_氨基酸代谢系列
羟脯-氨酸(HYP)测试盒_氨基酸代谢系列
测定方法:分光光度法
产品规格:50管/48样
注 意 : 正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
HYP是机体胶原蛋白主要成分之一,胶原蛋白大多分布于皮肤、腱、软骨和血管等,因此HYP含量是反映胶原组织代谢及纤维化程度的一项重要指标。
羟脯-氨酸(HYP)测试盒_氨基酸代谢系列
测定原理:
样品经酸水解产生游离的HYP,进一步被氯胺T氧化,氧化产物与对二甲氨基苯-甲醛反应,产生红色化合物,在560nm处有特征吸收峰。通过测定样品水解液560nm吸光值,可计算HYP含量。
自备实验用品及仪器:
天平、烘箱、玻璃管、离心机、水浴锅、可见分光光度计、1 mL玻璃比色皿、无水乙醇、异丙醇、6mol/L盐酸和蒸馏水。
试剂组成和配制:
组织提取液:6mol/L盐酸,自备。浓盐酸:H2O(V/V)= 1:1,室温保存。
细胞提取液:液体100mL×1瓶,4℃保存。
试剂一:液体10mL×1瓶,4℃避光保存。
试剂二:液体10mL×1瓶,4℃避光保存。
羟脯-氨酸提取:
1.组织:称取约0.5g样品于玻璃管,加入5mL的组织提取液,置于110℃烘箱,水解6至12小时,用提取液定容至5mL,12000g,25℃,离心20min,取上清待测。
2.细胞:取500万个细胞,加入2mL的细胞提取液,于高压消毒器中15磅保持30min,自然降压后待测。
3.血清游离羟脯-氨酸提取:取0.2mL血清,加入1mL无水乙醇使蛋白质沉淀,8000g4℃离心5min。将上清倒入另一个EP管,氮吹或沸水浴将乙醇挥发干。冷却后再加入0.4mL50%异丙醇,充分溶解混匀待测。