谷氨-酰胺合成酶(GS)测试盒_氨基酸代谢系列
谷氨-酰胺合成酶(GS)测试盒_氨基酸代谢系列
测定方法:分光光度法
产品规格:50管/24样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义
GS(EC 6.3.1.2)主要存在于植物中,是生物体内氨同化的关键酶之一,催化铵离子和谷-氨酸合成谷氨-酰胺,不仅可以防止过多的铵离子对生物有毒性,而且谷氨-酰胺也是氨的主要储存和运输形式。
谷氨-酰胺合成酶(GS)测试盒_氨基酸代谢系列
测定原理
GS在ATP和Mg2+存在下,催化铵离子和谷-氨酸合成谷氨-酰胺;谷氨-酰胺进一步转化为γ─谷氨酰基异羟肟酸,在酸性条件下形成的络合物在540nm处有大吸收峰,可用分光光度计测定。
所需的仪器和用品
可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制
提取液:30mL×1瓶,4℃保存。
试剂一:12mL×1瓶,-20℃保存,临用前37℃预热20min,充分混匀,如有沉淀,静置10min,取上清待用。
试剂二:12mL×1瓶,-20℃保存,临用前37℃预热20min,充分混匀,如有沉淀,静置10min,取上清待用。
试剂三:粉剂×2瓶,-20℃保存。用时每瓶加入5mL蒸馏水充分溶解待用。
试剂四:15mL×1瓶,4℃保存。
样本测定的准备
1、细菌、细胞或组织样品的制备:
细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
2、血清(浆)样品:直接检测。