谷氨-酰胺合成酶(GS)测试盒_氨基酸代谢系列

测定方法：分光光度法

产品规格：50管/24样

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义

GS（EC 6.3.1.2）主要存在于植物中，是生物体内氨同化的关键酶之一，催化铵离子和谷-氨酸合成谷氨-酰胺，不仅可以防止过多的铵离子对生物有毒性，而且谷氨-酰胺也是氨的主要储存和运输形式。

谷氨-酰胺合成酶(GS)测试盒_氨基酸代谢系列

测定原理

GS在ATP和Mg2+存在下，催化铵离子和谷-氨酸合成谷氨-酰胺；谷氨-酰胺进一步转化为γ─谷氨酰基异羟肟酸，在酸性条件下形成的络合物在540nm处有最大吸收峰，可用分光光度计测定。

所需的仪器和用品

可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制

提取液：30mL×1瓶，4℃保存。

试剂一：12mL×1瓶，-20℃保存，临用前37℃预热20min，充分混匀，如有沉淀，静置10min，取上清待用。

试剂二：12mL×1瓶，-20℃保存，临用前37℃预热20min，充分混匀，如有沉淀，静置10min，取上清待用。

试剂三：粉剂×2瓶，-20℃保存。用时每瓶加入5mL蒸馏水充分溶解待用。

试剂四：15mL×1瓶，4℃保存。

样本测定的准备

1、细菌、细胞或组织样品的制备：

细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2、血清（浆）样品：直接检测。