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脯-氨酸脱氢酶(ProDH)测试盒_氨基酸代谢系列

  • 更新时间:  2022-08-03
  • 产品型号:  50管/48样
  • 简单描述
  • 脯-氨酸脱氢酶(ProDH)测试盒_氨基酸代谢系列由上海纪宁生物公司提供,包括ProDH检测试剂盒说明书,免费代测,规格,包装,品牌等关于有关本司测试盒所有产品的详细介绍。
详细介绍

脯-氨酸脱氢酶(ProDH)测试盒_氨基酸代谢系列

测定方法:分光光度法

产品规格:50管/48样

注   意 : 正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

ProDH是存在于线粒体内的催化脯-氨酸降解的关键酶。脯-氨酸是分布-广泛的一种渗透物质,在胁迫条件下很多植物可以通过增加合成、减少降解而在体内累积大量脯-氨酸,降低ProDH活性对于调节渗透平衡、防止渗透胁迫对植物造成伤害、清除自由基、保护细胞结构具有重要意义。

脯-氨酸脱氢酶(ProDH)测试盒_氨基酸代谢系列

测定原理:

利用异硫氰酸甲酯检测ProDH催化的脱氢反应,600nm处吸光值的吸光值的变化反映酶活性的高低。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制:

提取液:60mL×1瓶,4℃保存;

试剂一:液体2 mL×1支, 4℃保存;

试剂二:液体50 mL×1瓶, 4℃保存;

试剂三:粉剂×1瓶, 4℃保存;临用前加入8mL蒸馏水充分溶解待用,用不完的试剂4℃保存;

试剂四:粉剂×1瓶, 4℃保存;临用前加入8mL蒸馏水充分溶解待用,用不完的试剂4℃保存;

试剂五:粉剂×5支,4℃保存;

粗酶液提取:

按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g样本,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆,1500g 4℃离心15min,取上清液于一支新的EP管中,加入一滴试剂一(用10μL的枪头加入),涡旋混匀,冰浴放置30min后,16000g 4℃离心20min,取上清置冰上待测。

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测定步骤:

1、分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至600nm,蒸馏水调零。

2、样本测定

(1)混合液的配制:首先将试剂三和试剂四配成溶液(见试剂的组成和配制),临用前根据用量按照试剂二(V):试剂三(V):试剂四(V)=7.2(mL):0.9(mL):0.9(mL)的比例充分混匀。(注意:现配现用,用多少配多少),置于30℃水浴5min;

(2)试剂五的配制:取试剂五一支,临用前加入1mL蒸馏水充分溶解待用,现配现用。

(3)1mL玻璃比色皿中加入175μL样本、75μL试剂五和750μL混合液,混匀,立即记录600nm处初始吸光值A1和10min后的吸光值A2,计算ΔA=A2-A1。


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