氨基酸代谢_吡咯啉5羧酸合成酶P5CS测试盒

测定方法：微量法

产品规格：100管/48样

注    意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：                           

脯-氨酸是植物体内适应逆境胁迫的一种重要的渗透调节物质。高等植物中脯-氨酸代谢因其初始底物不同，分为谷-氨酸( Glu) 和鸟-氨酸( Orn) 两条合成途径。吡咯啉-5-羧酸合成酶（P5CS， Δ1-pyrroline-5-carboxylate synthetase）是以谷氨-酸为前体合成脯-氨酸途径的关键酶，对植物适应逆境胁迫起关键作用。

氨基酸代谢_吡咯啉5羧酸合成酶P5CS测试盒

测定原理：

吡咯啉-5-羧酸合成酶催化谷-氨酸生成P5C过程中分解ATP生成ADP和无机磷，通过钼酸铵比色法测定单位时间内产生无机磷的量可确定P5CS活性。

需自备的仪器和用品：

紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

试剂组成和配制：

试剂一：液体60 mL×1瓶，4℃保存；

试剂二：液体12 mL×1瓶，4℃保存；

试剂三：液体12 mL×1瓶，4℃保存；

试剂四：粉剂×1瓶，4℃保存，用时加入25 mL蒸馏水，溶解后4℃保存一周；

试剂五：粉剂×1瓶，4℃保存，用时加入25 mL蒸馏水，溶解后4℃保存一周；

试剂六：液体25mL×1瓶，室温保存；

试剂七：10mmol/L标准磷贮备液10mL×1瓶，4℃保存。

0.5μmol/mL 标准磷应用液配制：将试剂七 20倍稀释，即取 0.1mL试剂七加1.9mL蒸馏水充分混匀。

定磷剂的配制：按H2O: 试剂四:试剂五:试剂六=2:1:1:1 的比例配制，配好的定磷剂应为浅黄色。若无色则

试剂失效，若是蓝色则为磷污染，定磷剂现用现配。

注意：配试剂最好用新的烧杯、玻棒和玻璃移液器，也可以用一次性塑料器皿，避免磷污染。

样品酶液的制备：

1、组织样品：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2、血清（浆）样品：直接检测