氨基酸代谢_吡咯啉5羧酸还原酶P5CR测试盒

测定方法：微量法

产品规格：100管/96样

注    意：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：

吡咯啉-5-羧酸还原酶( P5CRs) 是普遍存在于原核和真核生物中的一类重要的管家蛋白。其主要功能是催化脯-氨酸生物合成的后一步反应，将吡咯啉-5-羧酸( P5C) 转化为脯-氨酸，在调节细胞凋亡等一系列病理和生理过程中起着重要作用。

氨基酸代谢_吡咯啉5羧酸还原酶P5CR测试盒

测定原理：

P5CR 具有噻唑烷-4-羧酸脱氢酶活性，催化噻唑烷-4-羧酸的脱氢反应，同时将 NAD 转化为NADH，使 WST-8 变成橙，测定 450nm 下吸光值增加速率来反映酶的活性。

需自备的仪器和用品：

酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。

试剂组成和配制：

提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存；

试剂一：液体 25mL×1 瓶，4℃保存；

试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存；

试剂三：粉剂×1 瓶，-20℃保存；

试剂四：液体 1.5mL×1 瓶，4℃避光保存。

粗酶液提取：

细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；12000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。12000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。