氨基酸代谢_吡咯啉5羧酸还原酶P5CR测试盒
氨基酸代谢_吡咯啉5羧酸还原酶P5CR测试盒
测定方法:微量法
产品规格:100管/96样
注 意:正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
吡咯啉-5-羧酸还原酶( P5CRs) 是普遍存在于原核和真核生物中的一类重要的管家蛋白。其主要功能是催化脯-氨酸生物合成的最后一步反应,将吡咯啉-5-羧酸( P5C) 转化为脯-氨酸,在调节细胞凋亡等一系列病理和生理过程中起着重要作用。
氨基酸代谢_吡咯啉5羧酸还原酶P5CR测试盒
测定原理:
P5CR 具有噻唑烷-4-羧酸脱氢酶活性,催化噻唑烷-4-羧酸的脱氢反应,同时将 NAD 转化为NADH,使 WST-8 变成橙黄色,测定 450nm 下吸光值增加速率来反映酶的活性。
需自备的仪器和用品:
酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制:
提取液:液体 100mL×1 瓶,4℃保存;
试剂一:液体 25mL×1 瓶,4℃保存;
试剂二:粉剂×1 瓶,4℃保存;
试剂三:粉剂×1 瓶,-20℃保存;
试剂四:液体 1.5mL×1 瓶,4℃避光保存。
粗酶液提取:
细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);12000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液),进行冰浴匀浆。12000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。