土壤_土壤外切β14葡聚糖酶纤维二糖水解酶
土壤_土壤外切β14葡聚糖酶纤维二糖水解酶
测定方法:微量法
产品规格:100管/48样
注 意:正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
C1(EC3.2.1.91)存在于细菌、真菌和动物体内,是纤维素酶系的组份之一,C1催化多聚糖链的末端非还原端释放出纤维二糖和葡萄糖。
土壤_土壤外切β14葡聚糖酶纤维二糖水解酶
测定原理:
采用3,5-二硝基水杨酸法测定S-C1催化微晶纤维素降解产生的还原糖的含量。
需自备的仪器和用品:
酶标仪/可见分光光度计、水浴锅、离心机、可调式移液器、96孔板/微量石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制:
提取液:液体100mL×1瓶,4℃保存;
试剂一:液体6mL×1瓶,4℃保存;
试剂二:液体25mL×1瓶,4℃保存;
样品测定的准备:
称取约0.1g新鲜土样或风干土样,加入1mL提取液,进行冰浴匀浆,室温振荡提取30min,然后10000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
测定步骤:
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至540nm,蒸馏水调零。
2、加样表(在EP管中依次加入下列试剂):
试剂名称(μL)测定管对照管
样本1010
试剂一 100
蒸馏水 100
混匀,37℃准确水浴2h
试剂二 200200
混匀, 90℃水浴10min(盖紧,防止水分散失),冷却后,取200μL至微量石英比色皿或96孔板中,测540nm下吸光值A,计算ΔA=A测定管-A对照管。每个测定管需设一个对照管。