土壤_土壤N乙酰βD葡萄糖苷酶S-NAG测试盒
土壤_土壤N乙酰βD葡萄糖苷酶S-NAG测试盒
测定方法:微量法
产品规格:100管/48样
注 意:正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
S-NAG是溶酶体中的一种酸性水解酶,由土壤微生物分泌。S-NAG活性变化与机体某些病理状态密切相关。
土壤_土壤N乙酰βD葡萄糖苷酶S-NAG测试盒
测定原理:
S-NAG分解β-N-乙酰氨基葡萄糖苷生成对-硝基苯-酚,后者在400nm有大吸收峰,通过测定吸光值升高速率来计算NAG活性。
自备用品:
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、甲苯(不允许快递)和蒸馏水。
试剂组成和配制:
试剂一:甲苯5mL×1瓶,4℃保存;(自备)
试剂二:粉剂×1瓶,-20℃保存;临用前加入10mL蒸馏水,充分溶解备用,用不完的试剂仍-20℃保存;
试剂三:液体20mL×1瓶,4℃保存;
试剂四:液体15mL×1瓶,4℃保存;
样品处理:
新鲜土样自然风干或37度烘箱风干,过30~50目筛。
测定步骤:
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至400nm,蒸馏水调零。
2、加样表
试剂名称测定管对照管
风干土样(g)0.020.02
试剂一(μL)1010
室温振荡混匀15min90℃振荡混匀15min
试剂二(μL)130
蒸馏水130
试剂三(μL)160160
混匀, 37℃振荡反应1h后,90℃水浴5min(盖紧,防止水分散失),流水冷却,
10000g 25℃离心10min,取上清液(在EP管或96孔板中加入下列试剂)
上清液(μL)7070
试剂四(μL)130130
充分混匀,室温静置2min后, 400nm处测定吸光值A,计算ΔA=A测定管-A对照管。每个测定管设一个对照管。