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丙酮酸磷酸双激酶PPDK测试盒_光合作用系列

  • 更新时间:  2022-08-01
  • 产品型号:  50管/48样
  • 简单描述
  • 丙酮酸磷酸双激酶PPDK测试盒_光合作用系列由上海纪宁生物公司提供,包括PPDK检测试剂盒说明书,免费代测,规格,包装,品牌等关于有关本司测试盒所有产品的详细介绍。
详细介绍

丙酮酸磷酸双激酶PPDK测试盒_光合作用系列

测定方法:分光光度法

产品规格:50管/48样

注   意 :正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

丙酮酸磷酸双激酶(pyruvate phosphate dikinase, PPDK, EC 2.7.9.1)是C4途径和景天科酸代谢途径的限速酶,催化ATP、丙酮酸和Pi经三步反应生成磷酸烯醇式丙酮酸。该酶主要存在于C4植物的叶绿体基质中,对光合功能具有重要调节作用。

丙酮酸磷酸双激酶PPDK测试盒_光合作用系列

测定原理:

PPDK的逆向反应催化磷酸烯醇式丙酮酸、AMP和PPi生成丙酮酸、ATP和Pi,乳酸脱氢酶进一步催化丙酮酸和NADH生成乳酸和NAD+,在340nm测定NADH减少速率,计算PPDK活性。

需自备的仪器和用品:

紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制:

提取液:60mL×1瓶,4℃保存;

试剂一:液体60 mL×1瓶, 4℃保存;

试剂二:粉剂×2瓶,-20℃保存;

试剂三 :液体60μL×1支,4℃保存;体积较少,若沾在管壁上,临用前可低速离心后使用。

样本的前处理: 

按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

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测定步骤和加样表:

1、分光光度计预热30min以上,调节波长至340nm,蒸馏水调零。

2、样本测定

(1)工作液的配制:临用前取试剂二一瓶加入25mL试剂一和12.5μL试剂三,充分混匀,置于37℃水浴5min;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。

(2)在1mL石英比色皿中加入50μL样本和950μL工作液,混匀,立即记录340nm处初始吸光值A1和37℃反应5min后的吸光值A2,计算ΔA=A1-A2。


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