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磷酸丙糖异构酶(TPI)测试盒_光合作用系列

  • 更新时间:  2022-08-01
  • 产品型号:  50管/48样
  • 简单描述
  • 磷酸丙糖异构酶(TPI)测试盒_光合作用系列由上海纪宁生物公司提供,包括TPI检测试剂盒说明书,免费代测,规格,包装,品牌等关于有关本司测试盒所有产品的详细介绍
详细介绍

磷酸丙糖异构酶(TPI)测试盒_光合作用系列

测定方法:分光光度法

产品规格:50管/48样

注   意 :正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

植物叶绿体中磷酸丙糖异构酶是光合作用中参与calvin循环的重要酶。作用于磷酸甘油醛和磷酸二羟丙酮之间的转化,磷酸二羟丙酮能快速透过叶绿体的包膜进入细胞质,并在其中逐步转化为蔗糖。

磷酸丙糖异构酶(TPI)测试盒_光合作用系列

测定原理:

磷酸丙糖异构酶将磷酸二羟丙酮转化为3-磷酸甘油醛,3-磷酸甘油醛与NAD在3-磷酸甘油醛脱氢酶的作用下生成3-磷酸甘油酸和NADH,340nm处的吸光度变化反映了磷酸丙糖异构酶的活性的高低。

自备实验用品及仪器:

天平、低温离心机、研钵、震荡仪、紫外分光光度计、1 mL石英比色皿。

试剂组成和配制:

提取液一:液体50mL×1瓶,4℃保存。

提取液二:液体50mL×1瓶,4℃保存。

试剂一:液体30mL×1瓶,4℃保存。

试剂二:粉剂×1瓶,-20℃避光保存。临用前加5mL蒸馏水充分溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。

试剂三:粉剂×1瓶,-20℃避光保存。临用前加5 mL蒸馏水充分溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。

试剂四:粉剂×1瓶,-20℃避光保存。临用前加5 mL蒸馏水充分溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。

酶液提取:

①总TPI酶提取:建议称取约0.1g样本,加入1mL提取液一,冰浴匀浆后超声破碎(冰浴,200W,破碎3s,间歇7s,总时间1min),然后4℃,8000g离心10min,取上清测定。

②胞浆和叶绿体TPI酶的分离:按照植物组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g样本,加入1mL提取液一),冰浴匀浆后于4℃,200g离心5min,弃沉淀,取上清在4℃,8000g离心10min,取上清用于测定胞浆TPI酶活性,取沉淀加1mL提取液二,震荡溶解后超声破碎(冰浴,200W,破碎3s,间歇7s,总时间1min),然后4℃,8000g离心10min,取上清测定叶绿体中TPI酶活性。

建议测定总TPI酶活性,按照步骤①提取粗酶液,若需要分别测定胞浆和叶绿体中的TPI,则按照步骤②提取粗酶液。

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测定操作:

1.分光光度计预热30min,调节波长至340nm,蒸馏水调零。

2.取1mL石英比色皿,依次加入600μL试剂一,100μL试剂二,100μL试剂三,100μL试剂四,100μL粗酶液,充分混匀,记录340nm处10s的吸光值A1和310s的吸光值A2,△A=A2-A1


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