Na+k+ ——ATP酶测试盒_氧化磷酸化系列
Na+k+ ——ATP酶测试盒_氧化磷酸化系列
测定方法:分光光度法
产品规格:50管/24样
注 意 :正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
Ca++ Mg++-ATP酶广泛分布于植物、动物、微生物和细胞中,可催化ATP水解生成ADP和无机磷。
测定原理:
根据Ca++ Mg++-ATP酶分解ATP生成ADP及无机磷,通过测定无机磷的量来确定ATP酶活性高低。
Na+k+ ——ATP酶测试盒_氧化磷酸化系列
需自备的仪器及用品:
可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制:
提取液: 液体50mL ×1 瓶,4℃保存。
试剂一:液体 10mL×1 瓶,4℃保存。
试剂二:液体 5mL×1 瓶,4℃保存。
试剂三:液体 5ml×1 瓶,4℃保存。
试剂四:粉剂×3 支,-20℃保存。用时每支加1mL蒸馏水,现用现配;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
试剂五:液体 5mL×1 瓶,4℃保存。
试剂六:粉剂×1瓶,4℃保存。用时加入3mL蒸馏水, 4℃保存。
试剂七:粉剂×1瓶, 4℃保存。用时加入25mL蒸馏水,溶解后4℃保存一周。
试剂八:粉剂×1瓶, 4℃保存。用时加入25mL蒸馏水,溶解后4℃保存一周。
试剂九:液体25mL×1 瓶,室温保存。
试剂十:10mmol/L 标准磷贮备液 10mL×1 瓶,4℃保存。
0.5μmol/mL 标准磷应用液配制:将试剂十 20倍稀释,即取 0.1mL试剂十加1.9mL蒸馏水充分混匀。
定磷剂的配制:按H2O: 试剂七:试剂八:试剂九=2:1:1:1 的比例配制,配好的定磷剂应为浅。若无色则试剂失效,若是蓝色则为磷污染,定磷剂现用现配。
注意:配试剂好用新的烧杯、玻棒和玻璃移液器,也可以用一次性塑料器皿,避免磷污染。
样品酶液的制备:
1、细菌、细胞或组织样品的制备:
细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
2、血清(浆)样品:直接检测。