Na+k+  ——ATP酶测试盒_氧化磷酸化系列

测定方法：分光光度法

产品规格：50管/24样

注   意 ：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：

Ca++ Mg++-ATP酶广泛分布于植物、动物、微生物和细胞中，可催化ATP水解生成ADP和无机磷。

测定原理：

根据Ca++ Mg++-ATP酶分解ATP生成ADP及无机磷，通过测定无机磷的量来确定ATP酶活性高低。

Na+k+  ——ATP酶测试盒_氧化磷酸化系列

需自备的仪器及用品:

可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制：

提取液： 液体50mL ×1 瓶，4℃保存。

试剂一：液体 10mL×1 瓶，4℃保存。

试剂二：液体 5mL×1 瓶，4℃保存。

试剂三：液体 5ml×1 瓶，4℃保存。

试剂四：粉剂×3 支，-20℃保存。用时每支加1mL蒸馏水，现用现配；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

试剂五：液体 5mL×1 瓶，4℃保存。

试剂六：粉剂×1瓶，4℃保存。用时加入3mL蒸馏水， 4℃保存。

试剂七：粉剂×1瓶, 4℃保存。用时加入25mL蒸馏水，溶解后4℃保存一周。

试剂八：粉剂×1瓶, 4℃保存。用时加入25mL蒸馏水，溶解后4℃保存一周。

试剂九：液体25mL×1 瓶，室温保存。

试剂十：10mmol/L 标准磷贮备液 10mL×1 瓶，4℃保存。

0.5μmol/mL 标准磷应用液配制：将试剂十 20倍稀释，即取 0.1mL试剂十加1.9mL蒸馏水充分混匀。

定磷剂的配制：按H2O: 试剂七:试剂八:试剂九=2:1:1:1 的比例配制，配好的定磷剂应为浅黄色。若无色则试剂失效，若是蓝色则为磷污染，定磷剂现用现配。

注意：配试剂最好用新的烧杯、玻棒和玻璃移液器，也可以用一次性塑料器皿，避免磷污染。

样品酶液的制备：

1、细菌、细胞或组织样品的制备：

细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2、血清（浆）样品：直接检测。