氮代谢系列_谷-氨酸合成酶(GOGAT)测试盒
氮代谢系列_谷-氨酸合成酶(GOGAT)测试盒
测定方法:微量法
产品规格:100管/96样
注 意:正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
GOGAT广泛分布于植物中,和谷-氨酰胺合成酶共同构成GS/GOGAT循环,参与氨同化的调控。
氮代谢系列_谷-氨酸合成酶(GOGAT)测试盒
测定原理:
GOGAT催化谷-氨酰胺的氨基转移到α-酮戊二酸,形成两分子的谷-氨酸;同时NADH氧化生成NAD+,340nm吸光度的下降速率可以反映GOGAT活性大小。
需自备的仪器和用品:
紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制:
提取液:液体100mL×1瓶,4℃保存;
试剂一:液体20mL×1瓶,4℃保存;
试剂二:粉剂×2瓶,4℃保存;
粗酶液提取:
细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
测定步骤:
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至340nm,蒸馏水调零。
2、样本测定
(1)在试剂二中加入9mL试剂一充分溶解混匀,置于37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)水浴5min;
现配现用(配好后3h内用完);
(2)在微量石英比色皿或96孔板中加入20μL样本和180μL试剂二,混匀,立即记录340nm处20s时的吸光值A1和 5min20s后的吸光值A2,计算ΔA=A1-A2。