酸性蛋白酶(ACP)测试盒_蛋白-酶系列
酸性蛋白酶(ACP)测试盒_蛋白-酶系列
测定方法:分光光度法
产品规格:50管/24样
注 意: 正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
ACP是一种在酸性环境下催化蛋白质水解的酶。该酶主要用于酒精发酵、啤酒酿造、毛皮软化、果酒澄清、酱油酿造、饲料等。
酸性蛋白酶(ACP)测试盒_蛋白-酶系列
测定原理:
酸性条件下,ACP催化酪蛋白水解产生酪-氨酸;在碱性条件下,酪-氨酸还原磷钼酸化合物生成钨蓝;钨蓝在680nm有特征吸收峰,通过测定其吸光度增加,来计算ACP活性。
自备仪器和样品:
可见分光光度计、水浴锅、磁力搅拌器、可调式移液枪、1mL玻璃比色皿、1.5 mL EP管和蒸馏水。
试剂组成和配置:
液体一:1.5mL×1支,4℃保存。
液体二:1mL×1支,4℃保存。
试剂一的配制:临用前按液体一:液体二:蒸馏水=76(μL):17(μL):18(mL)的比例配制,现配现用,如出现白色絮状沉淀则不能用。
试剂二:粉剂×1瓶,4℃保存。临用前加10 mL蒸馏水溶解。
试剂三:粉剂×1瓶,4℃避光保存。临用前加入20 mL试剂一,沸水浴中磁力搅拌溶解。(可在烧杯上盖一层保鲜膜,注意观察,避免水分全部蒸发,一般加热15-30分钟,该试剂为过饱和试剂,充分混匀后仍出现颗粒物不溶物不影响使用)。
试剂四:粉剂×1瓶,4℃保存。临用前加入50 mL蒸馏水溶解。
试剂五:液体10mL×1瓶,4℃保存。
标准品:液体1mL×1支,0.25 μ mol/mL标准酪-氨酸溶液,4℃保存。
粗酶液提取:
1. 试剂一的配制:见试剂的组成和配制。
2. 组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)冰浴匀浆,8000g,4℃离心10min,取上清,即粗酶液。
3. 血清或培养液:直接测定。
4. 细菌、真菌:按照细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后8000g,4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。