BCA蛋白法含量测试盒_蛋白-含量系列
BCA蛋白法含量测试盒_蛋白-含量系列
测定方法:分光光度法
产品规格:50管/48样
注 意 : 正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
样品可溶性蛋白质含量常常用于酶活性计算。此外,可溶性蛋白质含量也用于食品等质量分析。
BCA蛋白法含量测试盒_蛋白-含量系列
测定原理:
碱性条件下,蛋白质中半胱-氨酸、胱-氨酸、色-氨酸、酪-氨酸以及肽键,能将Cu2+还原成Cu+;2分子的BCA与Cu+结合,生成紫色络合物,在540-595nm有吸收峰,562nm处吸收峰-强。
自备仪器和用品:
台式离心机、恒温水浴锅、可见分光光度计、移液器、1 mL玻璃比色皿和蒸馏水。
试剂组成和配制:
试剂A:液体60mL×1瓶,4℃保存。
试剂B:液体1.2mL×1支,4℃保存。
标准蛋白:液体2 mL×1支,4℃保存。
工作液配制:
临用前请根据拟用工作液体积(样本数×1 mL),将试剂A和B按照50:1的比例混合,盖紧后充分混匀。
样品中可溶性蛋白质提取:
1.液体样品:澄清无色液体样品可以直接测定。
2.组织样品:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液(自备,根据需要选用酶提取缓冲液或者蒸馏水或者生理盐水)
冰浴匀浆,8000g,4℃离心10min,取上清,即待测液。
3. 细菌、细胞:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后8000g,4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。