BCA蛋白法含量测试盒_蛋白-含量系列

测定方法：分光光度法

产品规格：50管/48样

注   意 ： 正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：

样品可溶性蛋白质含量常常用于酶活性计算。此外，可溶性蛋白质含量也用于食品等质量分析。

BCA蛋白法含量测试盒_蛋白-含量系列

测定原理：

碱性条件下，蛋白质中半胱-氨酸、胱-氨酸、色-氨酸、酪-氨酸以及肽键，能将Cu2+还原成Cu+；2分子的BCA与Cu+结合，生成紫色络合物，在540-595nm有吸收峰，562nm处吸收峰-强。

自备仪器和用品：

台式离心机、恒温水浴锅、可见分光光度计、移液器、1 mL玻璃比色皿和蒸馏水。

试剂组成和配制：

试剂A：液体60mL×1瓶，4℃保存。

试剂B：液体1.2mL×1支，4℃保存。

标准蛋白：液体2 mL×1支，4℃保存。

工作液配制：

临用前请根据拟用工作液体积（样本数×1 mL），将试剂A和B按照50：1的比例混合，盖紧后充分混匀。

样品中可溶性蛋白质提取：

1.液体样品：澄清无色液体样品可以直接测定。

2.组织样品：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液（自备，根据需要选用酶提取缓冲液或者蒸馏水或者生理盐水）

冰浴匀浆，8000g，4℃离心10min，取上清，即待测液。

3. 细菌、细胞：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。