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P450系列_细胞色素b5含量测试盒

  • 更新时间:  2022-07-29
  • 产品型号:  100管/96样
  • 简单描述
  • P450系列_细胞色素b5含量测试盒由上海纪宁生物公司提供,包括细胞色素b5含量检测试剂盒说明书,免费代测,规格,包装,品牌等关于有关本司测试盒所有产品的详细介绍
详细介绍

P450系列_细胞色素b5含量测试盒

测定方法:微量法

产品规格:100管/96样

注    意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

细胞色素P450酶是一组主要存在于肝脏的同工酶,在外源物质代谢中具有重要作用,尤其是药物和毒物的代谢。细胞色素P450和细胞色素b5是P450酶系的两个血红素蛋白,其比值的变化与P450代谢活性密切相关。

P450系列_细胞色素b5含量测试盒

测定原理:

氧化型细胞色素b5经连二亚硫酸钠还原后,在424nm处有大吸收峰,通过测定424nm和490nm处吸光值的差异,即可计算出细胞色素b5的含量。

自备仪器和用品:

普通离心机,超速离心机、可调式移液枪、紫外分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、和蒸馏水。

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试剂组成和配制:

试剂一:粉剂×2瓶,4℃保存。临用前各加100mL蒸馏水,充分溶解。

试剂二:液体×1瓶,4℃保存。

试剂三:粉剂×1瓶,4℃保存。

工作液配制:临用前配制,戴一次性手套,小心打开试剂三瓶盖,加试剂二20mL充分溶解,4℃避光可保存1周。

样品中细胞色素b5提取:

1、除去细胞核,线粒体等大分子物质:称约0.5g组织,加入1mL试剂一,冰上充分研磨,10 000g 4℃离心30min,取上清液,转入超速离心管中。

2、粗制微粒体:100 000g,4℃离心60min,弃上清液。

3、除血红蛋白等杂质:向步骤2的沉淀中加1mL试剂一,盖紧后充分震荡溶解,100 000g离心30min,弃上清液。

4、待测液:向步骤3的沉淀中加试剂二0.5mL,盖紧后充分震荡溶解,即待测液,该待测液需当天测定。

细胞色素b5含量测定操作:

1. 分光光度计/酶标仪预热30 min。

2. 工作液置于25℃水浴中预热30 min。

3. 空白管:取1mL玻璃比色皿,加入10 μL蒸馏水,200μL工作液,室温静置2 min,424nm和490nm处吸光值,424nm处吸光值记为A空白管1,490nm处吸光值记为A空白管2。△A空白管= A空白管1- A空白管2

4. 测定管:取1mL玻璃比色皿,加入10 μL待测液,200μL工作液,室温静置2 min,424nm和490nm处吸光值,424nm处吸光值记为A测定管1,490nm处吸光值记为A测定管2。

△A测定管= A测定管1- A测定管2。

注意:只需要做一个空白管。


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