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P450系列_NADPH-细胞-色素C还原酶NCR测试盒

  • 更新时间:  2022-07-29
  • 产品型号:  100管/96样
  • 简单描述
  • P450系列_NADPH-细胞-色素C还原酶NCR测试盒由上海纪宁生物公司提供,包括NCR测试盒检测试剂盒说明书,免费代测,规格,包装,品牌等关于有关本司测试盒所有产品的详细介绍
详细介绍

P450系列_NADPH-细胞-色素C还原酶NCR测试盒

测定方法:微量法

产品规格:100管/96样

注    意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

细胞色素P450酶是一组主要存在于肝脏的同工酶,在外源物质代谢中具有重要作用,尤其是药物和毒物的代谢。NCR作为P450酶系的重要一员,催化氧化型P450还原再生。

P450系列_NADPH-细胞-色素C还原酶NCR测试盒

测定原理:

NCR催化NADPH还原氧化型细胞-色素C,还原型细胞-色素C在550nm处有特征吸收峰;通过测定550nm吸光度的增加速率,来计算NCR活性。


自备仪器和用品:

普通离心机,超速离心机、可调式移液枪、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板和蒸馏水。

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试剂组成和配置:

试剂一:粉剂×2瓶,4℃保存。临用前根据用量每瓶加100mL蒸馏水充分溶解。

试剂二:液体×1瓶,4℃保存。

试剂三:粉剂×1管,-20℃保存。临用前配制,加1.04 mL蒸馏水充分溶解,4℃保存。

试剂四:粉剂×1管,4℃保存。临用前配制,加1100 μL蒸馏水充分溶解,4℃保存。


粗酶液提取:

1、除去细胞核和线粒体等:称约0.5g组织,加入4℃预冷的1 mL试剂一,冰上充分研磨,10 000g 4℃离心30min,取上清液,转移到超速离心管中。

2、粗制微粒体:4℃,100 000g,离心60min,弃上清液。

3、除血红蛋白等杂质:向步骤2的沉淀中加1 mL试剂一,盖紧后充分震荡溶解,100 000g离心30min,弃上清液。

4、最终微粒体:向步骤3的沉淀中加试剂二0.5 mL,盖紧后充分震荡溶解,4℃保存待测。

NADPH-细胞-色素C还原酶测定操作:

1. 分光光度计/酶标仪预热30 min,调节波长到550 nm,蒸馏水调零。

2. 试剂二在37℃水浴中预热30min。

3. 空白管:取微量石英比色皿/96孔板,依次加入10μL蒸馏水、180μL试剂二、10μL试剂三和10μL试剂四,迅速混匀后于550nm处测定2min内吸光值变化,第10s和第130s吸光值。△A空白管=A2-A1。

4. 测定管:取微量石英比色皿/96孔板,依次加入10μL提取液、180μL试剂二、10μL试剂三和10μL试剂四,迅速混匀后于550nm处测定2min内吸光值变化,第10s和第130s吸光值。△A测定管=A4-A3。

注意:空白管只需做一次。


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