细胞色素b5含量测试盒_P450系列
细胞色素b5含量测试盒_P450系列
测定方法:分光光度法
产品规格:50管/48样
注 意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
胞色素P450酶是一组主要存在于肝脏的同工酶,在外源物质代谢中具有重要作用,尤其是药物和毒物的代谢。细胞色素P450和细胞色素b5是P450酶系的两个血红素蛋白,其比值的变化与P450代谢活性密切相关。
细胞色素b5含量测试盒_P450系列
测定原理:
氧化型细胞色素b5经连二亚硫酸钠还原后,在424nm处有大吸收峰,通过测定424nm和490nm处吸光值的差异,即可计算出细胞色素b5的含量。
自备仪器和用品:
可见分光光度计、普通离心机,超速离心机、可调式移液枪、1mL玻璃比色皿和蒸馏水。
试剂组成和配制:
试剂一:粉剂×1瓶,4℃保存。临用前加100mL蒸馏水,充分溶解。
试剂二:液体×1瓶,4℃保存。
试剂三:粉剂×1瓶,4℃保存;
工作液配制:临用前配制,戴一次性手套,小心打开试剂三瓶盖,加试剂二50 mL充分溶解,4℃避光可保存1周。
样品中细胞色素b5提取:
1、除去细胞核,线粒体等大分子物质:称约0.5g组织,加入1mL试剂一,冰上充分研磨,10 000g 4℃离心30min,取上清液,转入超速离心管中。
2、粗制微粒体:100 000g,4℃离心60min,弃上清液。
3、除血红蛋白等杂质:向步骤2的沉淀中加1mL试剂一,盖紧后充分震荡溶解,100 000g离心30min,弃上清液。
4、待测液:向步骤3的沉淀中加试剂二0.5mL,盖紧后充分震荡溶解,即待测液,该待测液需当天测定。