红-霉素-N-脱甲基酶(ERND)测试盒_P450系列

测定方法：分光光度法

产品规格：50管/24样

注    意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：

细胞色素P450酶是一组主要存在于肝脏的酶系，在外源物质代谢中，尤其是药物和毒物的代谢，具有重要作用。ERND在P450酶系中相当于CYP2B亚型，与药物代谢的去甲基化密切相关。CYP2B具有催化底物形成非活性易于排泄的代谢产物而具有解毒作用，也可使某些药物经CYP2B代谢活化。

红-霉素-N-脱甲基酶(ERND)测试盒_P450系列

测定原理：

ERND催化红-霉素释放甲醛，通过Nash比色测定甲醛含量，即可计算出ERND活性。

自备仪器和用品：

可见分光光度计、普通离心机，超速离心机、可调式移液枪、1mL玻璃比色皿、蒸馏水和冰。

试剂组成和配制：

试剂一：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加50 mL蒸馏水溶解。

试剂二：液体×1瓶，4℃保存。

试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加2.6 mL蒸馏水，充分溶解。

试剂四：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加2.6 mL蒸馏水，充分溶解。

试剂五：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前，加蒸馏水9 mL充分溶解。

试剂六：液体×1瓶，4℃保存。

试剂七：液体×1瓶，4℃保存。

标准液：液体×1瓶，-20℃保存。临用前取1.5 mL EP 管，加入10μl标准液，加990μl蒸馏水，混匀即为0.05 mmol/L标准甲醛-溶液，4℃保存。

粗酶液提取：

1、除去细胞核，线粒体等大分子物质：称约0.5g组织，加入1mL试剂一，冰上充分研磨，10 000g 4℃离心30min，取上清液，转入超速离心管中。

2、粗制微粒体：100 000g，4℃，离心60min，弃上清液。

3、除血红蛋白等杂质：向步骤2的沉淀中加1mL试剂一，盖紧后充分震荡溶解，100 000g离心30min，弃上清液。

4、最终微粒体：向步骤3的沉淀中加试剂二0.5mL，充分震荡溶解，即粗酶液，待测。该待测液需当天使用。