苯胺-4羟化酶(AH)测试盒_P450系列

测定方法：分光光度法

产品规格：50管/24样

注    意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：

细胞色素P450酶是一组主要存在于肝脏的同工酶，在外源物质代谢中具有重要作用，尤其是药物和毒物的代谢。AH在P450酶系中相当于CYP2E1亚型，CYP2E1不仅参与了药物的代谢，而且还能催化多种前致癌物和前毒物的活化过程。

苯胺-4羟化酶(AH)测试盒_P450系列

测定原理：

AH催化苯胺羟化后产生的4-氨基酚，进一步转变为酚-吲哚复合物，在630nm处有特征吸收峰；通过测定630nm吸光度增加速率，来计算AH活性。

自备仪器及用品：

可见分光光度计、普通离心机、超速离心机、可调式移液枪、1mL玻璃比色皿、双蒸水和冰。

试剂组成和配制：

试剂一：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加入50 mL蒸馏水，充分溶解。

试剂二：液体×1瓶，4℃保存。

试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加入26 mL蒸馏水，充分溶解。

试剂四：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加入13 mL蒸馏水，充分溶解。

试剂五：液体×1瓶，4℃保存。

试剂六：粉剂×1瓶（腐蚀性试剂），4℃避光保存。临用前加入26 mL蒸馏水，充分溶解。

试剂七：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加入26 mL蒸馏水充分溶解。

标准液：液体×1瓶，10μmol/L，4℃避光保存。

粗酶液提取：

1、除去细胞核，线粒体等大分子物质：称约0.5g组织，加入1mL试剂一，冰上充分研磨，10 000g 4℃，离心30min，取上清液，转移到超速离心管中。

2、粗制微粒体： 100 000g 4℃，离心60min，弃上清液。

3、除血红蛋白等杂质：向步骤2的沉淀中加1mL试剂一，盖紧后充分震荡溶解，100 000g离心30min，弃上清液。

4、最终微粒体：向步骤3的沉淀中加试剂二0.5mL，盖紧后充分震荡溶解，即粗酶液，待测。