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甲基柠檬酸合酶(MCS)测试盒_三羧酸循环系列

  • 更新时间:  2022-07-28
  • 产品型号:  10管/9样
  • 简单描述
  • 甲基柠檬酸合酶(MCS)测试盒_三羧酸循环系列由上海纪宁生物公司提供,包括MCS检测试剂盒说明书,免费代测,规格,包装,品牌等关于有关本司测试盒所有产品的详细介绍
详细介绍

甲基柠檬酸合酶(MCS)测试盒_三羧酸循环系列

测定方法:分光光度法

产品规格:10管/9样

注    意:正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:                           

MCS广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体基质中,与柠檬酸合酶(CS)共同参与三羧酸循环的调节。

甲基柠檬酸合酶(MCS)测试盒_三羧酸循环系列

测定原理:

MCS催化丙酰CoA和草酰乙酸产生甲基柠檬酰COA,进一步水解产生甲基柠檬酸;该反应促使无色的DTNB转变成黄色的TNB,在 412nm处有特征吸光值。

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需自备的仪器和用品:

可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰、无水乙醇和蒸馏水

试剂组成和配制:

试剂一:液体10mL×1瓶,-20℃保存;

试剂二:液体2mL×1瓶,-20℃保存;

试剂三:液体0.2mL×1支,-20℃保存;

试剂四:液体10mL×1瓶,4℃保存;

试剂五:粉剂×1支,4℃保存,临用前加入320μL无水乙醇;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;

试剂六:粉剂×1支,-20℃保存,临用前加入320μL蒸馏水;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;

试剂七:粉剂×1支,-20℃保存,临用前加入320μL蒸馏水;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;

组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离:

①称取约0.1g组织或收集500万细胞,加入1mL试剂一和10uL 试剂三,用冰浴匀浆器或研钵匀浆。

②将匀浆600g,4℃离心5min。

③弃沉淀,将上清液移至另一离心管中,11000g,4℃离心10min。

④上清液即胞浆提取物,可用于测定从线粒体泄漏的CS(此步可选做)。

⑤在步骤④中的沉淀中加入200uL试剂二和2uL 试剂三,超声波破碎(冰浴,功率20%或200W,超声3秒,间隔10秒,重复30次),用于线粒体CS测定。


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