甲基柠檬酸合酶(MCS)测试盒_三羧酸循环系列

测定方法：分光光度法

产品规格：50管/48样

注    意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：                           

MCS广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体基质中，与柠檬酸合酶（CS）共同参与三羧酸循环的调节。

甲基柠檬酸合酶(MCS)测试盒_三羧酸循环系列

测定原理：

MCS催化丙酰CoA和草酰乙酸产生甲基柠檬酰COA，进一步水解产生甲基柠檬酸；该反应促使无色的DTNB转变成的TNB，在 412nm处有特征吸光值。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰、无水乙醇和蒸馏水

试剂组成和配制：

试剂一：液体50mL×1瓶，-20℃保存；

试剂二：液体10mL×1瓶，-20℃保存；

试剂三：液体1mL×1支，-20℃保存；

试剂四：液体50mL×1瓶，4℃保存；

试剂五：粉剂×2支，4℃保存，临用前加入800μL无水乙醇；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

试剂六：粉剂×4支，-20℃保存，临用前加入400μL蒸馏水；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

试剂七：粉剂×2支，-20℃保存，临用前加入800μL蒸馏水；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

样本的前处理：

组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离：

①称取约0.1g组织或收集500万细胞，加入1mL试剂一和10uL 试剂三，用冰浴匀浆器或研钵匀浆。

②将匀浆600g，4℃离心5min。

③弃沉淀，将上清液移至另一离心管中，11000g，4℃离心10min。

④上清液即胞浆提取物，可用于测定从线粒体泄漏的CS（此步可选做）。

⑤在步骤④中的沉淀中加入200uL试剂二和2uL 试剂三，超声波破碎（冰浴，功率20％或200W，超声3秒，间隔10秒，重复30次），用于线粒体CS测定。