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线粒体柠檬酸MCA含量测试盒_三羧酸循环系列

  • 更新时间:  2022-07-28
  • 产品型号:  50管/48样
  • 简单描述
  • 线粒体柠檬酸MCA含量测试盒_三羧酸循环系列由上海纪宁生物公司提供,包括MCA检测试剂盒说明书,免费代测,规格,包装,品牌等关于有关本司测试盒所有产品的详细介绍
详细介绍

线粒体柠檬酸MCA含量测试盒_三羧酸循环系列

测定方法:分光光度法

产品规格:50管/48样

注    意:正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

CA是线粒体三羧酸循环的第一个中间产物,由柠檬酸合酶催化乙酰CoA与草酰乙酸合成,其含量是三羧酸循环强度的主要指标之一。

配合测定丙酮酸含量、丙酮酸脱氢酶活性、乙酰CoA含量、柠檬酸合酶活性和CA含量,其中(1)丙酮酸含量和丙酮酸脱氢酶活性变化可以反映糖酵解进行程度,(2)综合分析丙酮酸含量、丙酮酸脱氢酶活性和乙酰CoA含量变化可以反映脂肪酸β-氧化途径提供的乙酰CoA情况,(3)乙酰CoA含量、柠檬酸合酶活性和CA含量变化可以反映三羧酸循环进行状况。

线粒体柠檬酸MCA含量测试盒_三羧酸循环系列

测定原理:

CA在柠檬酸裂解酶的作用下,生成α-酮酸(草酰乙酸);在弱酸性条件下,α-酮酸进一步与苯肼反应,生成相应的α-酮酸苯腙;α-酮酸苯腙在330nm处有吸收峰,该波长下吸光度的变化程度可反映出CA的含量。

自备仪器和用品:

分光光度计、水浴锅、可调式移液枪、1mL石英比色皿、研钵和蒸馏水。

试剂组成和配制:

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酸性提取液:液体50mL×1瓶,4℃保存。

碱性提取液:液体50mL×1瓶,4℃保存。

试剂一:液体15mL×1瓶,4℃保存。

试剂二:液体5mL×1瓶,4℃保存。

试剂三:粉剂×1瓶,4℃保存;临用前加入15mL蒸馏水充分溶解待用;用不完的试剂4℃保存。

标准品:液体1mL×1支,10μmol/mL柠檬酸标准液,4℃保存。

线粒体中柠檬酸提取:

称0.05~0.1g样品(建议称0.1g样本),加入0.5mL酸性提取液,冰上充分研磨,600g/min 4℃离心5min;取上清至另一EP管中,11000g/min 4℃离心10min,弃上清(取300μL该上清液和300μL碱性提取液中和后可用于细胞质CA含量测定);沉淀即线粒体,向沉淀中加入0.5mL酸性提取液,充分悬浮溶解,超声波破碎(功率20%,超声3秒,间隔10秒,重复30次),取此溶液300μL和300μL碱性提取液中和,混匀,置冰上待测(不可用于蛋白质含量测定)。



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