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乙酰CoA(Acetyl-CoA)测试盒_三羧酸循环

  • 更新时间:  2022-07-28
  • 产品型号:  10管/9样
  • 简单描述
  • 乙酰CoA(Acetyl-CoA)测试盒_三羧酸循环由上海纪宁生物公司提供,包括Acetyl-CoA检测试剂盒说明书,免费代测,规格,包装,品牌等关于有关本司测试盒所有产品的详细介绍
详细介绍

乙酰CoA(Acetyl-CoA)测试盒_三羧酸循环

测定方法:分光光度法

产品规格:10管/9样

注    意:正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

乙酰CoA广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。是生物体能源物质代谢过程中产生的一种重要的中间代谢产物。在体内能源物质代谢中是一个枢纽性的物质。糖、脂肪、蛋白质三大营养物质通过乙酰CoA汇聚成一条共同的代谢通路-三羧酸循环和氧化磷酸化,经过这条通路彻底氧化生成二氧化碳和水,释放能量用于ATP合成。此外,乙酰CoA是合成脂肪酸,酮体及其衍生物等生理活性物质的前体物质。

乙酰CoA(Acetyl-CoA)测试盒_三羧酸循环

测定原理:

苹果酸脱氢酶可催化苹果酸和NAD生成草酰乙酸和NADH。柠檬酸合酶可催化乙酰CoA和草酰乙酸生成柠檬酸和CoA。利用苹果酸脱氢酶和柠檬酸合酶的偶联反应,乙酰CoA含量和NADH的生成速率成正比,340nm下吸光值的上升速率反应了乙酰CoA含量的高低。

需自备的仪器和用品:

紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。


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试剂的组成和配制:

试剂一:液体10mL×1瓶,4℃保存。

试剂二:粉剂×1支,-20℃保存。临用前加入100μL试剂五充分溶解备用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。

试剂三:液体4μL×1支,4℃保存。临用前加入100μL试剂五充分溶解备用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。

试剂四:粉剂×1瓶,-20℃保存。临用前加入9mL试剂五充分溶解备用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。

试剂五:液体10mL×1瓶,4℃保存。

工作液的配制:临用前请根据拟用工作液体积(样本数×0.92 m L),将试剂二、三和四按照1:1:90的比例混合,或者直接把试剂二和试剂三加入到试剂四中混匀(可以测定9样);加样前置37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)水浴锅中预热30 min;现配现用;

乙酰CoA的提取:

1、细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL试剂一),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

2、组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。


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