柠檬酸(CA)含量测试盒_三羧酸循环系列

测定方法：分光光度法

产品规格：50管/48样

注    意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：

CA是生物体内常见的有机酸，是重要的食品风味物质。此外，CA是三羧酸循环步反应的产物。

柠檬酸(CA)含量测试盒_三羧酸循环系列

测定原理：

酸性条件下，柠檬酸还原Cr6+生成Cr3+，在545nm处有特征吸收峰；通过测定545nm吸光值的增加，即可计算出样品中柠檬酸含量。

自备仪器和用品：

可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调式移液枪、1mL玻璃比色皿和蒸馏水。

试剂组成和配制：

试剂一：液体×1瓶，4℃保存。

试剂二：液体×1瓶，4℃保存。

试剂三：液体×1支，－20℃保存。

试剂四：粉剂×1瓶，室温保存。临用前配制，加入5mL试剂一，充分溶解。

试剂五：液体×1瓶，4℃避光保存。

标准品：液体×1支，250μmol/L柠檬酸标准液，4℃保存。

样品处理：

1.液体样品：取0.1mL液体加试剂一0.9mL，充分混匀，11000g， 4℃离心10min，取上清液待测。

2.组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。11000g，4℃离心10min，取上清置冰上待测。

3.线粒体：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆，600g/min，4℃离心5min；取上清至另一EP管中，11000g，4℃离心10min，弃上清（此上清液可用于细胞质CA含量测定）；向沉淀中加试剂二200μl，以及试剂三2μl，充分悬浮溶解，11000g，4℃离心10min，取上清液待测。

4.细菌、真菌中：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；11000g，4℃离心10min，取上清置冰上待测。