微量法_羟甲基戊二酰CoA合成酶HMGCS测试盒

测定方法：微量法

产品规格：100管/96样

注   意 ：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：

羟甲基戊二酰CoA合成酶是甲羟戊酸代谢途径中的关键酶，催化乙酰CoA与乙酰乙酰CoA生成羟甲基戊二酰CoA。

微量法_羟甲基戊二酰CoA合成酶HMGCS测试盒

测定原理：

HMGCS催化乙酰CoA与乙酰乙酰CoA生成羟甲基戊二酰CoA，同时产生CoASH，使DTNB转化为黄色的TNB，在412nm下有特征吸光值。

所需的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制：

提取液：100mL×1瓶，4℃保存；

试剂一：粉剂×1瓶，-20℃避光保存；临用前加入3mL蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；

试剂二：粉剂×1瓶，-20℃避光保存；临用前加入3mL蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；

试剂三：6mL×1瓶，4℃避光保存。

样本测定的准备：

1、细菌、细胞或组织样品的制备：

细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2、血清（浆）样品：直接检测。

测定步骤：

1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至412nm，蒸馏水调零。

2、在微量石英比色皿或96孔板中加入25μL试剂一、25μL试剂二和50μL试剂三，混匀，加入100μL样本上清，迅速混匀后记录412nm下初始吸光值A1和4min后的吸光值A2。计算ΔA＝A2-A1。