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三羧酸循环_线粒体苹果酸脱氢酶MDHm测试盒

  • 更新时间:  2022-07-28
  • 产品型号:  100管/96样
  • 简单描述
  • 三羧酸循环_线粒体苹果酸脱氢酶MDHm测试盒由上海纪宁生物公司提供,包括MDHm检测试剂盒说明书,免费代测,规格,包装,品牌等关于有关本司测试盒所有产品的详细介绍
详细介绍

三羧酸循环_线粒体苹果酸脱氢酶MDHm测试盒

测定方法:微量法

产品规格:100管/96样

注   意 :正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

MDH (EC 1.1.1.37)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,线粒体中MDH是TCA循环的关键酶之一,催化苹果酸形成草酰乙酸;相反,胞浆中MDH催化草酰乙酸形成苹果酸。草酰乙酸是重要的中间产物, 连接多条重要的代谢途径。因此,MDH在细胞多种生理活动中扮演着重要的角色,包括线粒体的能量代谢、 苹果酸-天冬氨酸穿梭系统、活性氧代谢和抗病性等。根据不同的辅酶特异性,MDH分为NAD-依赖的MDH和NADP-依赖的MDH,细菌中通常只含有NAD-MDH,在真核细胞中,NAD-MDH分布于细胞质和线粒体中。

三羧酸循环_线粒体苹果酸脱氢酶MDHm测试盒

测定原理:

MDHm催化NADH还原草酰乙酸生成苹果酸,导致340nm处光吸收下降。

需自备的仪器和用品:

紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸馏水。

试剂的组成和配制:

试剂一:100mL×1瓶,-20℃保存;

试剂二:20mL×1瓶,-20℃保存;

试剂三:1.5mL×1支,-20℃保存;

试剂四、液体20 mL×1瓶,在4℃保存;

试剂五、粉剂×1瓶,-20℃保存;

样本测定的准备:

组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离:

1、称取约0.1g组织或收集500万细胞,加入1mL试剂一和10uL 试剂三,用冰浴匀浆器或研钵匀浆。

2、将匀浆液于600g,4℃离心5min。

3、弃沉淀,将上清液移至另一离心管中,11000g,4℃离心10min。

4、上清液即胞浆提取物,可用于测定从线粒体泄漏的MDH(此步可选做)。

5、在步骤④的沉淀中加入200uL试剂二和2uL 试剂三,超声波破碎(冰浴,功率20%或200W,超声3秒,间隔10秒,重复30次),用于MDHm活性测定。


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测定步骤:

1、分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至340nm,蒸馏水调零。

2、检测工作液的配制:用时在试剂五中加入19mL试剂四和0.5mL蒸馏水,充分混匀待用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。

3、测定前将检测工作液在37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)水浴10min以上。

4、在微量石英比色皿或96孔板中加入5μL样本和195μL工作液,混匀后立即记录340nm处20s时的吸

光值A1和 1min20s后的吸光值A2,计算ΔA=A1-A2。


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