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三羧酸循环_α酮戊二酸脱氢酶α-KGDH测试盒

  • 更新时间:  2022-07-28
  • 产品型号:  100管/96样
  • 简单描述
  • 三羧酸循环_α酮戊二酸脱氢酶α-KGDH测试盒由上海纪宁生物公司提供,包括MFO检测试剂盒说明书,免费代测,规格,包装,品牌等关于有关本司测试盒所有产品的详细介绍
详细介绍

三羧酸循环_α酮戊二酸脱氢酶α-KGDH测试盒

测定方法:微量法

产品规格:100管/96样

注   意 :正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

α-KGDH(EC 1.2.4.2)广泛存在于动物、植物微生物和培养细胞的线粒体中,是三羧酸循环调控关键酶之一,催化α-酮戊二酸氧化脱羧生成琥珀酰CoA。

三羧酸循环_α酮戊二酸脱氢酶α-KGDH测试盒

测定原理:

α-KGDH催化α-酮戊二酸、NAD+ 和CoA生成琥珀酰CoA、 二氧化碳和 NADH,NADH在340 nm有特征吸收峰,以NADH的生成速率表示α-KGDH活性。

需自备的仪器和用品:

紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制:

试剂一:100mL×1瓶,-20℃保存;

试剂二:20mL×1瓶,-20℃保存;

试剂三:1.5mL×1支,-20℃保存;

试剂四:液体20mL×1瓶,4℃保存;

试剂五:粉剂×1瓶,-20℃保存;

试剂六:粉剂×1支,-20℃保存;

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样本的前处理:

组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离:

1、称取约0.1g组织或收集500万细胞,加入1mL试剂一和10uL 试剂三,用冰浴匀浆器或研钵匀浆。

2、将匀浆600g,4℃离心5min。

3、弃沉淀,将上清液移至另一离心管中,11000g,4℃离心10min。

4、上清液即胞浆提取物,可用于测定从线粒体泄漏的α-KGDH(此步可选做)。

5、在步骤④的沉淀中加入200uL试剂二和2uL 试剂三,超声波破碎(冰浴,功率20%或200W,超声3秒,间隔10秒,重复30次),用于线粒体α-KGDH活性测定。


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