氧化与抗氧化系列_二胺氧化酶测试盒
氧化与抗氧化系列_二胺氧化酶测试盒
测定方法:微量法
产品规格:100管/48样
注 意 :正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
DAO(EC1.4.3.6)广泛存在于动物(肠粘膜、肺、肝脏、肾脏等)、植物和微生物中。催化多胺氧化为醛,其活性与核酸和蛋白合成密切相关,能够反映肠道机械屏障的完整性和受损伤程度。
氧化与抗氧化系列_二胺氧化酶测试盒
测定原理:
DAO催化尸胺产生醛和过氧化氢,外源添加过量的辣根过氧化物酶,催化过氧化氢氧化邻联茴香胺生成氧化型邻联茴香胺,在460nm处有特征吸收峰,通过测定该波长吸光度增加速率,计算DAO活性。
自备实验用品及仪器:
天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、蒸馏水。
试剂组成和配制:
提取液:液体120mL×1瓶,4℃保存。
试剂一:液体0.3mL×1支,4℃保存。
试剂二:液体2.5mL×1瓶,4℃保存。
试剂三:液体1.2mL×1管,4℃保存。
粗酶液提取:
1.组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液)进行冰浴匀浆,然后10000g,4℃离心20min,取上清,置冰上待测。
2.细菌、真菌:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后10000g,4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。
3.血清等液体:直接测定。
注意事项:
1、如果OD值小于0.01,适当加大提取用样本量;OD值大于0.8,粗酶液可适当稀释,或者减少提取用样本量。
2、样品蛋白质含量需要另外测定。