氧化与抗氧化系列_单宁酶(TAN)测试盒
氧化与抗氧化系列_单宁酶(TAN)测试盒
测定方法:微量法
产品规格:100管/48样
注 意 :正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
单宁酶全称是单宁酯酰水解酶(Tannase,EC 3.1.1.20),它可以水解没食子酸单宁中的酯键和缩酚羧键,生成没食子酸和葡萄糖。
氧化与抗氧化系列_单宁酶(TAN)测试盒
测定原理:
使用抗氧化剂没食子酸丙酯(PG)作为单宁酶酶促反应的底物,在270nn下测定底物PG反应前后的光密度变化,计算单宁酶酶活力。
需自备的的仪器和用品:
紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔UV板、研钵、冰、蒸馏水
试剂的组成和配制:
试剂一:液体100mL×2瓶,4℃保存;
试剂二:粉剂×1支,4℃保存;临用前每支加入6mL试剂一,充分溶解后备用;用不完的试剂4℃保存;
粗酶液提取:
按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一),进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
液体样本:直接取上清测定。
测定步骤:
1、分光光度计预热30min以上,调节波长到270 nm,蒸馏水调零。
2、加样表
试剂名称(μL)对照管测定管
95℃水浴5min后灭活的粗酶液50
粗酶液50
试剂二5050
混匀,40℃准确保温10 min后,置95℃水浴中10 min(盖紧,防止水分散失),冷却
试剂一900900
混匀,取200uL至微量石英比色皿或96孔UV板中,270nm处读取各管吸光值。计算ΔA=A对照-A测定。每个测定管需设个一个对照管。