微量法--总抗氧化能力(ABTS法)测试盒
微量法--总抗氧化能力(ABTS法)测试盒
测定方法:微量法
产品规格:100管/96样
注 意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
微量法--总抗氧化能力(ABTS法)测试盒
研究意义:
测定对象中各种抗氧化物质和抗氧化酶等构成总抗氧化水平。在生物学、医学和药学研究中常常检测血浆、血清、唾液尿液等各种体液,细胞或组织等裂解液、植物或中草药抽提液及各种抗氧化物(antioxidant)溶液的总抗氧化能力。
测定原理:
ABTS 法是使用常見泛的间接检测方法,可用于亲水性和亲脂性物质抗氧化能力测定。ABTS经氧化后生成稳定的蓝绿色阳离子自由基 ABTS+,能溶于水相或酸性乙醇介质中,在 734nm 处有大吸收。被测物质加入 ABTS+溶液后,所含抗氧化成分能与 ABTS+发生反应而使反应体系褪色。在 734nm 检测吸光度的变化,并以 Trolox 作为对照体系量化抗氧化物质的抗氧化能力。
自备实验用品:
恒温水浴锅、低温离心机、酶标仪、96 孔板和蒸馏水。
试剂组成和配制:
提取液:液体 120mL×1 瓶,4℃保存。
试剂一:液体 24mL×1 瓶,4℃避光保存。
试剂二:粉剂×2 瓶,4℃避光保存。
样品的制备:
(1)血清、血浆、唾液或尿液等液体样品
血浆(制备时可以使用肝素或柠檬酸钠抗凝,不宜使用 EDTA 抗凝)4℃,5000rpm 离心
10min,取上清待测。血清、唾液或尿液样品直接用于测定,也可以-80℃冻存(不宜超过
30d)后再测定。
(2) 组织样品
按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液)进行冰浴匀浆,然后 10000g,4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
(3) 细胞样品
按照细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞加入 1mL 提取液),冰浴超声波破碎(功率 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);10000g,4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
操作步骤:
1、 酶标仪预热 30min,调节波长至 734nm。
2、 工作液的配置:临用前取试剂二一瓶,加入 11mL 试剂一,震荡混匀 20min 后,静置,
取上清使用。(注意,现配现用)
3、操作表(在 EP 管中反应)