氧化与抗氧化_CHNO氧化酶XOD测试盒-微量法

测定方法：微量法

产品规格：100管/96样

注   意 ：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：

XOD（EC 1.17.3.2）催化CHNO氧化生成尿酸和超氧阴离子，是活性氧主要来源之一；同时也是核苷酸代谢的关键酶之一。XOD主要分布于哺乳动物的心，肺，肝脏等组织中，当肝功能受损时，XOD大量释放到血清中，对肝损害的诊断具有特异性的意义。

氧化与抗氧化_CHNO氧化酶XOD测试盒-微量法

测定原理：

XOD催化CHNO产生尿酸，尿酸在290nm下有特征吸收峰。

需自备的仪器和用品：

紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板（UV板）、研钵、冰和蒸馏水。

试剂组成和配制：

提取液：100mL×1瓶，4℃保存；

试剂一：30mL×1瓶，4℃保存；

试剂二：粉剂×2瓶，4℃保存。

粗酶液提取： 

1、细菌、细胞或组织样品的制备：

细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2、血清（浆）样品：直接检测。

操作步骤：

1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至290nm，蒸馏水调零。

2、XOD检测工作液的配制：用时在每瓶试剂二中加入15mL试剂一，充分混匀，待用；现配现用；

3、测定前将XOD检测工作液在37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴10min以上。

4、准备96孔UV板一块（非普通酶标板，普通酶标板只能透过可见光，不能透过紫外光，检测波长小于340nm务必使用UV板）。

5、在微量石英比色皿或96孔UV板中加入10μL样本和250μL工作液，立即混匀并计时，记录290nm下初始吸光值A1和1min后的吸光值A2。计算ΔA＝A2-A1。