(GSH)S-转移酶GST测试盒 _氧化与抗氧化

测定方法：分光光度法

产品规格：50管/48样

注 意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

(GSH)S-转移酶GST测试盒 _氧化与抗氧化

测定意义：

GST 是一种具有多种生理功能的蛋白质家族，主要存在于细胞质内。GST 是体内解毒酶系统的重要组成部分，主要催化各种化学物质及其代谢产物与 GSH 的巯基共价结合，使亲电化合物变为亲水物质，易于从胆汁或尿液中排泄，达到将体内各种潜在或具备毒性的物质降解并排出体外的目的。因此，GST 在保护细胞免受亲电子化合物的损伤中发挥着重要的生物学功能。此外，因为 GST 具有 GSH-Px 活性，亦称为 non-Se GSH-Px，具有修复氧化破坏的大分子如 DNA、蛋白质等的功能。注意，GST 催化的反应减少 GSH 含量，但是不增加GSSG 含量。

测定原理：

GST 催化 GSH 与 CDNB 结合，其结合产物的光吸收峰波长为 340nm；通过测定 340nm 波长处吸光度上升速率，即可计算出 GST 活性。

自备仪器和用品：

紫外分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调节移液器、1mL 石英比色皿和蒸馏水。

试剂组成和配置：

试剂一：液体 50mL×1 瓶，4℃保存。

试剂二：液体 45mL×1 瓶，4℃保存。

试剂三：粉剂×1 瓶，4℃保存。临用前加 5 mL 蒸馏水溶解。

粗酶液提取：

1.组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 试剂一）进行冰浴匀浆。8000g，4℃离心 10min，取上清置冰上待测。

2.细菌、真菌：按照细胞数量（104 个）：试剂一体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL 试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后 8000g，4℃，离心 10min，取上清置于冰上待测。

3.血清等液体：直接测定。

测定操作：

1.分光光度计预热 30 min，调节波长到 340 nm，用蒸馏水调零。

2.试剂三放在 25℃（一般物种）或者 37℃（哺乳动物）保温。

3.测定管：取 1mL 石英比色皿，加入 100μL 上清液，900μL 试剂二和 100μL 试剂三，迅速混匀后于 340nm 测定吸光度变化，记录 10 s 和 310 s 吸光度为 A1 和 A2。