丙二醛MDA测试盒_氧化与抗氧化系列_分光法

测定方法：分光光度法

产品规格：50管/48样

注    意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：

氧自由基作用于脂质的不饱和脂肪酸，生成过氧化脂质；后者逐渐分解为一系列复杂的化合物，其中包括MDA。通过检测MDA的水平即可检测脂质氧化的水平。

丙二醛MDA测试盒_氧化与抗氧化系列_分光法

测定原理：

MDA与硫代(thiobarbituric acid，TBA)缩合，生成红色产物，在532nm有最大吸收峰，进行比色后可估测样品中过氧化脂质的含量；同时测定600nm下的吸光度，利用532nm与600nm下的吸光度的差值计算MDA的含量。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配置：

提取液：液体60mL×1瓶，4℃保存；

试剂一：液体40mL×1瓶，4℃保存；

注意事项：

临用前注意试剂一是否*溶解，如未溶解，可以70℃-90℃加热，并振荡以促进溶解。

MDA提取：

1、细菌、细胞或组织样品的制备：

细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2、血清（浆）样品：直接检测。

测定步骤：

1、吸取0.6mL 试剂一于1.5mL离心管中，再加入0.2mL样本, 混匀。

2、95℃水浴中保温30min（盖紧，防止水分散失），置于冰浴中冷却，10000g，25℃，离心10min。

3、吸取上清液于1mL玻璃比色皿中，测定532nm和600nm处的吸光度，记为A532和A600，ΔA= A532-A600。