超氧化物歧化酶SOD测试盒(WST-8法)_分光法

测定方法：分光光度法

产品规格：50管/48样

注　意：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：

SOD（EC 1.15.1.1）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化超氧化物阴离子发生岐化作用，生成 H2O2 和 O2。SOD 不仅是超氧化物阴离子清除酶，也是 H2O2 主要生成酶，在生物抗氧化系统中具有重要作用。

超氧化物歧化酶SOD测试盒(WST-8法)_分光法

测定原理：

通过氧化酶反应系统产生超氧阴离子(O2-.)，O2-.可与 WST-8 反应产生水溶性染料甲臜，后者在 450nm 处有吸收；SOD 可清除 O2-.，从而抑制了甲臜的形成；反应液黄色越深，说明 SOD 活性愈低，反之活性越高。

需自备的仪器和用品：

分光光度计、离心机、移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水

试剂的组成和配制：

提取液：液体 60mL×1 瓶，4℃保存；

试剂一：液体 50mL×1 瓶，4℃避光保存；

试剂二：液体 300μL×1 支，4℃避光保存；

试剂三：液体 100μL×1 支，4℃保存；

试剂四：粉剂×2 瓶，4℃保存。

粗酶液提取：

1、细菌、细胞或组织样品的制备：

细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）； 8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

2、血清（浆）样品：直接检测。

测定步骤：

1、 分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 450nm，蒸馏水调零。

2、 试剂三的稀释：将试剂三用蒸馏水稀释 50 倍，用多少配多少。（试剂三和蒸馏水 1：49稀释。

3、 工作液配制：在试剂一加入 250μL 试剂二，充分混匀。配好的试剂 4℃避光可保存一周。（若一次性测定样本较少，可按照实际用量将试剂一和试剂二按照 20mL：0.1mL 的比例混匀配制）

4、将一瓶试剂四用 5mL 蒸馏水溶解（溶解后一周内用完）

5、样本测定（在 1mL 玻璃比色皿中依次加入下列试剂）