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丙酮酸激酶(PK)测试盒_糖酵解系列_分光法

  • 更新时间:  2022-07-26
  • 产品型号:  50管/48样
  • 简单描述
  • 丙酮酸激酶(PK)测试盒_糖酵解系列_分光法由上海纪宁生物公司提供,包括PK检测试剂盒说明书,免费代测,规格,包装,品牌等关于有关本司测试盒所有产品的详细介绍
详细介绍

丙酮酸激酶(PK)测试盒_糖酵解系列_分光法

测定方法:分光光度法

产品规格:50管/48样

注   意 :正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

PK(EC 2.7.1.40)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,催化糖酵解过程中的最后一步反应,是糖酵解过程中的主要限速酶之一,也是产生ATP的关键酶之一,因此测定PK活性具有重要意义。

丙酮酸激酶(PK)测试盒_糖酵解系列_分光法

测定原理:

PK催化磷酸烯醇式丙酮酸和ADP生成ATP和丙酮酸,乳酸脱氢酶进一步催化NADH和丙酮酸生成乳酸和NAD+,在340nm下测定NADH下降速率,即可反映PK活性。

需自备的仪器和用品:

紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水

试剂的组成和配制:

提取液:60mL×1瓶,4℃保存;

试剂一:液体50mL×1瓶,4℃保存;;

试剂二:粉剂×2瓶,-20℃保存;

试剂三:液体25μL×2支,4℃保存;

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样本的前处理:

1、细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

2、组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

3、血清(浆)样品:直接检测。

测定步骤:

1、分光光度计预热30min以上,调节波长至340nm,蒸馏水调零。

2、样本测定

(1)试剂二的配制:临用前取试剂二一瓶,加入22.5mL试剂一和2.65mL蒸馏水充分溶解,置于37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)水浴5min;现配现用。

(2)试剂三的配制:临用前取试剂三一支,加入1.5mL蒸馏水充分溶解待用;现配现用。

(3)在1mL石英比色皿中加入50μL样本、50μL试剂三和900μL试剂二,混匀,立即记录340nm处20s时的吸光值A1和 2min20s后的吸光值A2,计算ΔA=A1-A2。



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