己糖激酶(HK)测试盒_糖酵解系列_分光光度法

测定方法：分光光度法

产品规格：50管/48样

注   意 ：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：

HK（EC 2.7.1.1）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是葡萄糖分解过程中的个关键酶，催化葡萄糖转化为6-磷酸葡萄糖，6-磷酸葡萄糖是糖酵解和磷酸戊糖途径的交叉点。

测定原理：

HK催化葡萄糖合成6-磷酸葡萄糖，6-磷酸葡萄糖脱氢酶进一步催化6-磷酸葡萄糖脱氢生成NADPH，NADPH在340nm有特征吸收峰。

需自备的仪器和用品：

紫外分光光度计、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

己糖激酶(HK)测试盒_糖酵解系列_分光光度法

试剂的组成和配制：

提取液：60mL×1瓶，4℃保存；

试剂一：液体30mL×1瓶， 4℃保存；

试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入30mL蒸馏水充分溶解备用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

试剂三：液体5 mL×1瓶，4℃保存；

试剂四：粉剂×1支，-20℃保存，临用前加入4mL蒸馏水充分溶解备用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

试剂五：粉剂×1支，-20℃保存；临用前加入2mL蒸馏水充分溶解备用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

试剂六：粉剂×1支，-20℃保存；临用前加入250μL试剂一和250μL蒸馏水充分溶解备用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

样本的前处理：

1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

3、血清（浆）样品：直接检测。