己糖激酶(HK)测试盒_糖酵解系列_分光光度法
己糖激酶(HK)测试盒_糖酵解系列_分光光度法
测定方法:分光光度法
产品规格:50管/48样
注 意 :正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
HK(EC 2.7.1.1)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是葡萄糖分解过程中的个关键酶,催化葡萄糖转化为6-磷酸葡萄糖,6-磷酸葡萄糖是糖酵解和磷酸戊糖途径的交叉点。
测定原理:
HK催化葡萄糖合成6-磷酸葡萄糖,6-磷酸葡萄糖脱氢酶进一步催化6-磷酸葡萄糖脱氢生成NADPH,NADPH在340nm有特征吸收峰。
需自备的仪器和用品:
紫外分光光度计、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
己糖激酶(HK)测试盒_糖酵解系列_分光光度法
试剂的组成和配制:
提取液:60mL×1瓶,4℃保存;
试剂一:液体30mL×1瓶, 4℃保存;
试剂二:粉剂×1瓶,4℃保存;临用前加入30mL蒸馏水充分溶解备用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
试剂三:液体5 mL×1瓶,4℃保存;
试剂四:粉剂×1支,-20℃保存,临用前加入4mL蒸馏水充分溶解备用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
试剂五:粉剂×1支,-20℃保存;临用前加入2mL蒸馏水充分溶解备用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
试剂六:粉剂×1支,-20℃保存;临用前加入250μL试剂一和250μL蒸馏水充分溶解备用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
样本的前处理:
1、细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
2、组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
3、血清(浆)样品:直接检测。