糖酵解系列_果糖1,6二磷酸醛缩酶FBA测试盒
糖酵解系列_果糖1,6二磷酸醛缩酶FBA测试盒
测定方法:微量法
产品规格:100管/96样
注 意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
植物叶绿体中果糖 1,6-二磷酸醛缩酶是光合作用中参与 calvin 循环的重要酶。催化果糖 1,6-二磷酸和景天庚酮糖 1,7-二磷酸的合成反应,在各种逆境胁迫下表现不同的响应。
测定原理:
果糖 1,6-二磷酸醛缩酶催化果糖 1,6-二磷酸生成 3-磷酸甘油醛和磷酸二羟丙酮,在磷酸丙糖异构酶和 α-磷酸甘油脱氢酶作用下催化NADH和磷酸二羟丙酮生成NAD和α-磷酸甘油,340nm 处吸光值的变化可反映果糖 1,6-二磷酸醛缩酶活性的高低。
糖酵解系列_果糖1,6二磷酸醛缩酶FBA测试盒
自备实验用品及仪器:
天平、震荡仪、低温离心机、研钵、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板。
试剂组成和配制:
提取液一:液体 100mL×1 瓶,4℃保存。
提取液二:液体 100mL×1 瓶,4℃保存。
试剂一:液体 10mL×1 瓶,4℃避光保存。
试剂二:粉剂×1 瓶,-20℃避光保存。临用前加 2mL 蒸馏水充分溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
试剂三:粉剂×1 瓶,-20℃避光保存。临用前加 2 mL 蒸馏水充分溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
试剂四:粉剂×1 瓶,-20℃避光保存。临用前加 2 mL 蒸馏水充分溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
试剂
酶液提取:
①总 FBA 酶提取:建议称取约 0.1g 样本,加入 1mL 提取液一,冰浴匀浆后超声破碎(冰浴,200W,破碎 3s,间歇 7s,总时间 1min),然后 4℃,8000g 离心 10min,取上清测定。②胞浆和叶绿体 FBA 酶的分离:按照植物组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 样本,加入 1mL 提取液一),冰浴匀浆后于 4℃,200g 离心 5min,弃沉淀,取上清在 4℃,8000g 离心 10min,取上清用于测定胞浆 FBA 酶活性,取沉淀加 1mL 提取液二,震荡溶解后超声破碎(冰浴,200W,破碎 3s,间歇 7s,总时间 1min),然后4℃,8000g 离心 10min,取上清测定叶绿体中 FBA 酶活性。
建议测定总 FBA 酶活性,按照步骤①提取粗酶液,若需要分别测定胞浆和叶绿体中的 FBA,则按照步骤②提取粗酶液。
测定操作:
1.紫外分光光度计/酶标仪预热 30min,调节波长至 340nm,蒸馏水调零。
2.取微量石英比色皿/96 孔板,依次加入 100μL 试剂一,20μL 试剂二,20μL 试剂三,20μL试剂四,20μL 试剂五,20μL 粗酶液,充分混匀,记录 340nm 处 10s 的吸光值 A1 和 310s的吸光值 A2,△A=A1-A2