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糖酵解系列_果糖1,6二磷酸醛缩酶FBA测试盒

  • 更新时间:  2022-07-26
  • 产品型号:  100管/96样
  • 简单描述
  • 糖酵解系列_果糖1,6二磷酸醛缩酶FBA测试盒由上海纪宁生物公司提供,包括FBA检测试剂盒说明书,免费代测,规格,包装,品牌等关于有关本司测试盒所有产品的详细介绍
详细介绍

糖酵解系列_果糖1,6二磷酸醛缩酶FBA测试盒

测定方法:微量法

产品规格:100管/96样

注 意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

植物叶绿体中果糖 1,6-二磷酸醛缩酶是光合作用中参与 calvin 循环的重要酶。催化果糖 1,6-二磷酸和景天庚酮糖 1,7-二磷酸的合成反应,在各种逆境胁迫下表现不同的响应。

测定原理:

果糖 1,6-二磷酸醛缩酶催化果糖 1,6-二磷酸生成 3-磷酸甘油醛和磷酸二羟丙酮,在磷酸丙糖异构酶和 α-磷酸甘油脱氢酶作用下催化NADH和磷酸二羟丙酮生成NAD和α-磷酸甘油,340nm 处吸光值的变化可反映果糖 1,6-二磷酸醛缩酶活性的高低。

糖酵解系列_果糖1,6二磷酸醛缩酶FBA测试盒

自备实验用品及仪器:

天平、震荡仪、低温离心机、研钵、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板。

试剂组成和配制:

提取液一:液体 100mL×1 瓶,4℃保存。

提取液二:液体 100mL×1 瓶,4℃保存。

试剂一:液体 10mL×1 瓶,4℃避光保存。

试剂二:粉剂×1 瓶,-20℃避光保存。临用前加 2mL 蒸馏水充分溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。

试剂三:粉剂×1 瓶,-20℃避光保存。临用前加 2 mL 蒸馏水充分溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。

试剂四:粉剂×1 瓶,-20℃避光保存。临用前加 2 mL 蒸馏水充分溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。

试剂

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酶液提取:

①总 FBA 酶提取:建议称取约 0.1g 样本,加入 1mL 提取液一,冰浴匀浆后超声破碎(冰浴,200W,破碎 3s,间歇 7s,总时间 1min),然后 4℃,8000g 离心 10min,取上清测定。②胞浆和叶绿体 FBA 酶的分离:按照植物组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 样本,加入 1mL 提取液一),冰浴匀浆后于 4℃,200g 离心 5min,弃沉淀,取上清在 4℃,8000g 离心 10min,取上清用于测定胞浆 FBA 酶活性,取沉淀加 1mL 提取液二,震荡溶解后超声破碎(冰浴,200W,破碎 3s,间歇 7s,总时间 1min),然后4℃,8000g 离心 10min,取上清测定叶绿体中 FBA 酶活性。

建议测定总 FBA 酶活性,按照步骤①提取粗酶液,若需要分别测定胞浆和叶绿体中的 FBA,则按照步骤②提取粗酶液。

测定操作:

1.紫外分光光度计/酶标仪预热 30min,调节波长至 340nm,蒸馏水调零。

2.取微量石英比色皿/96 孔板,依次加入 100μL 试剂一,20μL 试剂二,20μL 试剂三,20μL试剂四,20μL 试剂五,20μL 粗酶液,充分混匀,记录 340nm 处 10s 的吸光值 A1 和 310s的吸光值 A2,△A=A1-A2



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